庞秋霞，张建红，米志宽，王爱红，郭贤利，魏晓丽

（1.延安大学医学院，陕西延安716000；2.宜川县人民医院，陕西宜川716000）

卵巢肿瘤患者血浆溶血磷脂酸测定及临床意义

庞秋霞1，张建红2，米志宽1，王爱红1，郭贤利1，魏晓丽1

（1.延安大学医学院，陕西延安716000；2.宜川县人民医院，陕西宜川716000）

目的探讨卵巢肿瘤患者血浆溶血磷脂酸（LPA）表达水平及其临床意义。方法观察LPA对卵巢癌细胞增殖力的影响；测定卵巢癌患者48例、卵巢良性肿瘤患者20例及14例健康妇女的血浆LPA水平，并作对比分析。结果LPA可增加细胞的增殖能力，且存在剂量依赖性。正常妇女和卵巢良性肿瘤患者血浆LPA水平无统计学意义；卵巢上皮性癌患者血浆LPA水平显著高于正常妇女和良性卵巢上皮性肿瘤患者（P＜0.01）。结论LPA与卵巢癌的发生发展相关，对卵巢上皮性癌的诊断和病情监测具有潜在的临床应用价值。

溶血磷脂酸；卵巢肿瘤

溶血磷脂酸（Lys ophosphatidicacid，LPA）是具有细胞间信号传递作用的脂类小分子物质，通过G蛋白受体介导的多种信号传导通路发挥其多种生物效应［1］。20世纪90年代末，发现LPA可以刺激体内外卵巢癌细胞的生长及增殖［2］，随着研究的不断深入，人们逐渐发现LPA与肿瘤，尤其是与卵巢恶性肿瘤的发生发展密切相关，特别是近两年来，又发现卵巢癌患者的腹水、血浆中存在较高浓度LPA。目前溶血磷脂酸在妇科肿瘤特别是卵巢癌方面的研究受到高度重视。本研究通过观察LPA对卵巢癌细胞增殖力的影响，测定卵巢恶性肿瘤患者血浆LPA水平，探讨LPA在卵巢恶性肿瘤诊断及病情监测中的临床意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

卵巢癌细胞株SKOV3（由延安大学医学实验中心保存）。所有血清均来自延安大学附属医院妇科在2009.9-2011.9进行手术治疗的患者，其中卵巢上皮性癌48例，年龄平均51岁。病理类型：浆液性囊腺癌28例，黏液性囊腺癌12例，透明细胞癌3例，子宫内膜样癌5例；手术病理分期采用国际妇产科联盟（FIG0）2000年的分期标准：Ⅰ期5例，Ⅱ期10例，Ⅲ期30例，Ⅳ期3例；病理分级：G17例，G215例，G326例；有淋巴结转移者19例，无淋巴结转移者29例；卵巢良性肿瘤20例，正常健康献血妇女14例为对照组。

1.2 LPA对卵巢癌细胞株增殖生长状况的影响

卵巢癌细胞株SKOV3用RPMI1640（含15%小牛血清）培养基常规培养于37℃、5%CO2孵箱，隔日分瓶，培养3 d后，进行细胞无血清培养，过夜约12 h后，分别加入不同浓度（5μM、20μM、80μM）的LPA，空白对照组加PBS液代替LPA，孵育24 h，观察细胞生长状况并进行分析比较。

1.3 ELISA方法检测血浆LPA水平

采集卵巢上皮性癌、卵巢良性肿瘤患者术前空腹外周静脉血及正常健康妇女的外周静脉血3 mL，离心分离血清置-80℃保存。严格按照LPA试剂盒（北京泰福仕科技开发有限公司）操作说明检测血浆LPA水平。

1.4 统计学处理

采用SPSS13.0统计软件包对检测数据进行F检验、χ2检验。

2 结果

2.1 LPA对卵巢癌细胞增殖力的影响

LPA加入到卵巢癌细胞（SKOV3）后，可增加细胞的增殖能力，且存在剂量依赖关系，5μM LPA较空白对照组能促进细胞增殖，20μM LPA较空白对照组促进细胞生长、增殖明显，80μM LPA较20μM LPA促进细胞生长、增殖明显。

2.2 卵巢肿瘤患者与健康妇女血浆LPA水平

表1 不同分组血浆LPA（μmol／L）水平比较（s）

表1 不同分组血浆LPA（μmol／L）水平比较（s）

组别 n 血浆LPA卵巢上皮性癌组14 1.74±0.71 48 6.48±1.61卵巢良性肿瘤组 20 2.85±0.95正常对照组

对三组之间血浆LPA水平进行方差分析，结果有统计学意义（F＝3.92，P＜0.05），进一步行两两比较，卵巢上皮性癌组血浆LPA水平显著高于卵巢良性肿瘤组（P＜0.05）与正常对照组（P＜0.01），而在卵巢良性肿瘤组与正常对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 血浆LPA水平与临床病理因素之间的关系

不同病理类型血浆LPA水平无差异，卵巢上皮癌患者血浆LPA水平与肿瘤的进展似乎有相关性，Ⅲ-Ⅳ期高于Ⅰ-Ⅱ期，但是差异无统计学意义（P＞0.05）。有远处转移的卵巢癌患者血浆LPA高于无远处转移的患者（P＜0.05），见表2。

表2 血浆LPA与卵巢癌临床病理因素的关系

按照说明书操作要求及标准计算结果：LPA＞3.2μmol／L为阳性，LPA≤3.2μmol／L为阴性。

3 讨论

LPA是近年来发现的一种具有生长因子样活性的脂质分子，它作为细胞间的多功能磷脂信使，通过G蛋白受体介导的多种信号途径，发挥多种生物学效应，LPA可诱导多种细胞发生增生性和形态学改变。正常人血中LPA水平很低，卵巢癌患者的腹水及血浆中LPA水平显著升高，而其他肿瘤患者如白血病、乳癌血浆LPA增高不明显，因而认为卵巢癌细胞可以产生LPA［3］。LPA能增强卵巢癌细胞的粘附，迁移，和浸润，是卵巢癌的潜在的标志物和治疗靶点［4］，且有望成为卵巢癌早期诊断指标及卵巢肿瘤术前良、恶性鉴别指标之一［5］。体外实验证实LPA能通过增强细胞周期蛋白D1启动子活性而提高卵巢癌细胞周期蛋白D1的蛋白水平，从而通过改变细胞周期进展促进卵巢癌细胞增殖［6］。国内学者观察不同浓度LPA对SKOV3细胞增殖的影响，并且合用MAPK信号传导通路的特异性阻断剂PD98059，研究发现当阻断MAPK信号传导通路后，LPA促增殖作用被明显抑制，提示LPA是通过激活MAPK信号传导通路促进卵巢癌细胞增殖［7］。Sutphen等［8］测定卵巢上皮性癌患者及正常对照组血浆LPA表达水平，结果显示卵巢上皮性癌患者术前血浆LPA水平明显高于正常对照组，且检测卵巢上皮性癌的敏感性为91.1%，特异性为92.6%。提示血浆LPA对卵巢上皮性癌的诊断具有较好的临床应用价值。我们的实验结果表明，LPA能增加卵巢癌细胞的增殖能力；在卵巢上皮癌患者中LPA高表达，且明显高于卵巢良性肿瘤组及正常对照组，而卵巢上皮癌患者血浆LPA水平与肿瘤的进展似乎有相关性，提示LPA与卵巢癌的生长、浸润和转移过程相关。

［1］Sakamoto S，Yokoyama M，Zhang X，et al.Increased expression of CYR61，an extracellular matrix signaling protein，in human benign prostatic hyperplasia and its regulation by lysophosphatidic acid［J］.Endocrinology，2004，145（6）：2929-2940.

［2］Mills GB，May C，McGill M，et al.A putative new growth factor inascitic fluid from ovanrian cancer patients：identification，charaterization，andmechanism of action［J］.CancerRes，1988，48：1066-1071.

［3］Shen Z，Wu M，Elson P，etal.Fatty acid composition of lysophosphatidic acid and lysophosphatidylinosital in plasma from patients with ovarian cancer and other gynecological diseases［J］.Gynecol，Oncol2001，83（1）：25-30.

［4］Ren J，Xiao Y J，Singh L S，et al.Lysophosphatidic acid is constitutively produced by human peritoneal mesothelial cells and enhances adhesion，migration，and invasion of ovarian cancer cells［J］.Cancer Res，2006，66（6）：3006-3014.

［5］Base T，Batbaros M，Baykara E，et al.Comparison of total plasma lysophosphatidic acid and serum CA-125 as a tumor marker in the diagnosis and follow up of patientswith epithelial ovarian cancer［J］.Gynecol Oncol，2010，21（4）：248-254.

［6］Hu YL，Albanese C，PestellRG，et al.Dualmechanisms for lysophosphatidic acid stimulation ofhuman ovarian carcinoma cells［J］.Natl Cancer Inst，2003，95（10）：733-740

［7］丁萍萍，李强.溶血磷脂酸促卵巢癌细胞增殖机制的研究.山东大学学报（医学版），2011，49（7）：35-38.

［8］Sutphen R，Yan Xu，Wilbanks D，et al.Lysophospholipids are potential biomarkers of ovarian cancer［J］.Cancer Epidemiology Biomarkers Prevention，2004，13（7）：1185-1191.

Detection and clinical significance of serum level of lysophosphatidic acid in patients w ith ovarian tumor

PANGQiu-xia1，ZHANG Jian-hong2，MIZhi-kuan1，WANG Ai-hong1，GUO Xian-li1，WEIXiao-li1

（1.Medical College of Yan＇an University，Yan'an 716000 China；2.YiChuan county's Hospital，716200 China）

ObjectiveTo study the serum levels of lysophosphatidic acid（LPA）in patientswith ovarian tumor and its clinical significance.M ethods Observe the proliferation ability of the ovarian cancer cell by LPA deal with；48 patients with ovarian tumor，20 patientswith benign ovarian tumors and 14 normalwomen were subjected to detect the serum levels of LPA and for comparative analysis.Results LPA promotes cell proliferation showing a dose-dependency.Levels of serum LPA in patients with epithelial ovarian cancer were higher significantly than those of normal women and benign cases（P＜0.01）.ConclusionLPA is related to the development of ovarian cancer.LPA may have a potential value for diagnosis of epithelial ovarian cancer.

Lysophosphatidic acid；Ovarian tumor

R737.31

A

1672－2639（2012）02－0004－03

2012－04－15；责任编辑 赵菊梅］

项目来源：延安市科技计划项目，2011ks-33