马晓娟,蔚 萍,妙 亮,边六交

(西北大学生命科学学院,陕西 西安 710069)

肿瘤的发生和发展依赖于新血管的不断形成，因此抑制新血管形成(Angiogenesis)进而抑制肿瘤的生成已成为治疗肿瘤的一个重要靶点[1]。1994年，O′Reilly等[2,3]发现内源性血管生成抑制剂Angiostatin是由纤溶酶原前4个饼环区组成；1997年，Cao等[4]发现纤溶酶原N端的第5个饼环区(Plasminogen kringle 5)同样具有抑制血管内皮细胞增殖和肿瘤生长的能力，而且抑制能力比Angiostatin更强。

血管生长抑制因子Kringle 5是目前发现的抑制血管内皮细胞增殖和肿瘤生长活性最强的纤溶酶原片段，在肿瘤治疗方面具有潜在的应用价值和广阔的市场前景。由于Kringle 5的来源有限，因此利用基因工程技术发酵生产重组Kringle 5具有重要的研究和应用价值。边六交等[5]对融合型血管生长抑制因子Kringle 5的发酵条件进行了优化；2011年，妙亮等[6]对可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 5进行了克隆表达、分离纯化和活性测定。

作者在上述研究的基础上，通过单因子实验对已经构建的表达可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 5的基因工程菌E.coliBL21(DE3) pET15b/K5分别进行发酵培养基和诱导表达条件的优化，拟为Kringle 5的进一步放大生产和临床应用奠定基础。

1 实验

1.1 菌种和质粒

宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)；表达质粒为携带血管生长抑制因子Kringle 5基因的重组质粒pET15b/K5；表达可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 5的基因工程菌E.coliBL21(DE3) pET15b/K5(所表达Kringle 5的分子量约为28.0 kD，以三聚体形式存在)为自行构建，保存于-70 ℃ 的15％甘油中。

1.2 试剂

蛋白胨、酵母粉，英国OXOID 公司；异丙基硫代-2-β-D-半乳糖苷(IPTG)、氨苄青霉素(Amp)，美国Amresco公司；……