江南

（湖南衡阳市中医医院，湖南 衡阳421001）

偏瘫康胶囊的质量标准研究

江南

（湖南衡阳市中医医院，湖南 衡阳421001）

目的：建立偏瘫康胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）对处方中的石菖蒲、丹参、赤芍、郁金、冰片进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定制剂中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量。结果：TLC法可检出石菖蒲、丹参、赤芍、郁金、冰片的特征斑点；丹参酮ⅡA的线性范围为0.032～0.32 μg（r＝0.999 9），平均回收率为99.28%（RSD=1.37%，n＝6）；丹酚酸B的线性范围为0.56～5.6 μg（r＝0.999 9），平均回收率为99.02%（RSD= 1.74%，n＝6）。结论：该质量标准可有效控制偏瘫康胶囊的质量。

偏瘫康胶囊；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

偏瘫康胶囊是由石菖蒲、丹参、赤芍、郁金、冰片等9味中药制成的复方制剂，具有活血化痰、祛瘀通络的功效。用于缺血性中风后遗症，痰瘀阻络，症见肢体偏瘫、语言蹇涩、舌唇紫暗、苔滑腻等。为保证偏瘫康胶囊的质量，本研究采用薄层色谱法（TLC）对方中石菖蒲、丹参、赤芍、郁金、冰片进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱法（HPLC）对方中丹参的主要有效成分丹参酮ⅡA和丹酚酸B进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-20AT高效液相色谱仪 （日本岛津公司），SPD-20AVP紫外检测器 （日本岛津公司），N2000色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）。

1.2 试药

偏瘫康胶囊及阴性样品 （衡阳市中医医院制剂室）；石菖蒲对照药材、丹参对照药材、赤芍对照药材、郁金对照药材、丹参酮ⅡA对照品、丹酚酸B对照品、芍药苷对照品、冰片对照品（原中国药品生物制品检定所）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 石菖蒲的鉴别[1-3]

取偏瘫康胶囊（以下简称胶囊）内容物0.4 g，加石油醚（60～ 90℃）20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚（60～ 90℃）1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。再取缺石菖蒲的阴性样品，同法制成阴性溶液。照TLC（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～ 90℃）-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，放置约 1 h，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。见图1。

图1 石菖蒲薄层色谱1石菖蒲对照药材 2偏瘫康胶囊 3缺石菖蒲的阴性样品注：T，实验时外周环境的温度；RH，相对湿度（下同）

2.2 丹参的鉴别[1,4]

取胶囊内容物1 g，加乙酸乙酯20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯 1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL中含2 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺丹参的阴性样品，同法制成阴性溶液。照TLC(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述4种溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图2。

图2 丹参薄层色谱1偏瘫康胶囊 2丹参对照药材 3丹参酮ⅡA对照品 4缺丹参的阴性样品

2.3 赤芍的鉴别[1,4-5]

取胶囊内容物3g，加水20mL，超声处理10min，滤过，滤液加乙醚15 mL，振摇提取，弃去乙醚液，水液加水饱和的正丁醇15 mL，振摇提取，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇 1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材0.5 g，加乙醇10 mL，超声处理5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇 1 mL使溶解，作为对照药材溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每 1 mL含 2 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺赤芍的阴性样品，同法制成阴性溶液。照TLC(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图3。

2.4 郁金的鉴别[1-2]

图3 赤芍薄层色谱1芍药苷对照品2偏瘫康胶囊3赤芍对照药材4缺赤芍的阴性样品

取胶囊内容物 4 g，加无水乙醇 50 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇 1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取郁金对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。再取缺郁金的阴性样品，同法制成阴性溶液。照TLC（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯 （17∶3）为展开剂，预饱和30 min，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图4。

图4 郁金薄层色谱1偏瘫康胶囊 2郁金对照药材 3缺郁金的阴性样品

2.5 冰片的鉴别[1,6-7]

取胶囊内容物1 g，加乙醚15 mL，超声处理15 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺冰片的阴性样品，同法制成阴性溶液。照TLC（中国药典2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图5。

图5 冰片薄层色谱图1冰片对照品 2偏瘫康胶囊 3缺冰片的阴性样品

3 含量测定

3.1 色谱条件

3.1.1 丹参酮ⅡA色谱条件[8-10]色谱柱Kromasil C18（4.6 mm×150 mm,5 μm)，柱温 25℃，流动相甲醇 -水 （75∶25），流速 1.0 mL/min，检测波长270 nm。理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2 000。

3.1.2 丹酚酸B色谱条件[8-10]色谱柱Kromasil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温 25℃，流动相甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59），流速 1.0 mL/min，检测波长286 nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2 000。

3.2 对照品溶液的制备

3.2.1 丹参酮ⅡA对照品溶液的制备 取丹参酮ⅡA对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.016 mg丹参酮ⅡA的溶液，即得。

3.2.2 丹酚酸B对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75%甲醇制成每1 mL含0.28 mg丹酚酸B的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备

3.3.1 丹参酮ⅡA供试品溶液的制备 取胶囊内容物0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.3.2 丹酚酸B供试品溶液的制备 取胶囊内容物 0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.4 阴性溶液的制备

取缺丹参的阴性样品，分别按3.3.1和3.3.2项下方法制备，即得。

3.5 系统适用性实验

3.5.1 丹参酮ⅡA系统适用性试验 分别精密吸取丹参酮ⅡA对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液各5 μL注入高效液相色谱仪，测定，见图6～8。丹参酮ⅡA保留时间约为32.5 min，与其他组分分离良好（分离度 ＞1.5），阴性溶液色谱图在丹参酮ⅡA峰位置无干扰。

3.5.2 丹酚酸B系统适用性实验 分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，测定，见图9～ 11。丹酚酸B保留时间约为22 min，与其他组分分离良好（分离度＞1.5），阴性溶液色谱图在丹酚酸B峰位置无干扰。

图6 丹参酮ⅡA对照品色谱

图7 丹参酮供试品色谱

图8 缺丹参阴性色谱

图9 丹酚酸B对照品色谱

图10 丹酚酸B供试品色谱

图11 缺丹参阴性色谱

3.6 线性关系考察

3.6.1 丹参酮ⅡA线性关系考察 精密吸取丹参酮ⅡA对照品溶液 2、8、10、12、16、20 μL进样，按拟定色谱条件测定峰面积，以对照品进样量X（μg）为横坐标、峰面积值Y（mv）为纵坐标，进行线性回归，丹参酮ⅡA回归方程

r=0.999 9，线性范围为0.032～0.32 μg。

3.6.2 丹酚酸B线性关系考察 精密吸取丹酚酸B对照品溶液 2、8、10、12、16、20 μL进样，按拟定色谱条件测定峰面积，以对照品进样量X（μg）为横坐标、峰面积值 Y（mv）为纵坐标，进行线性回归，丹酚酸B回归方程

r=0.999 9，线性范围为0.56～5.6 μg。

3.7 精密度试验

3.7.1 丹参酮ⅡA精密度试验 精密吸取丹参酮ⅡA对照品溶液5 μL，连续重复进样6次，丹参酮ⅡA峰面积的RSD为0.82%（n=6），表明本测定方法精密度良好。

3.7.2 丹酚酸B精密度试验 精密吸取丹酚酸B对照品溶液10 μL，连续重复进样6次，丹酚酸B峰面积的RSD为0.95%（n=6），表明本测定方法精密度良好。

3.8 稳定性试验

分别取同一批（110815）丹参酮ⅡA供试品溶液和丹酚酸B供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h测定峰面积。结果，丹参酮ⅡA供试品溶液的RSD=0.88%（n=6），丹酚酸 B供试品溶液的RSD=0.83%（n=6），表明两个供试品溶液在10 h内稳定。

3.9 重复性试验

3.9.1 丹参酮ⅡA重复性试验 取同一批号样品（110815）6份，精密称定，按3.3.1项下方法制备，进样5 μL测定，测得丹参酮ⅡA 2.44 mg/g，RSD为1.46%（n=6），表明本测定方法具有良好的重复性。

3.9.2 丹酚酸B重复性试验 取同一批号样品（110815）6份，精密称定，按3.3.2项下方法制备，进样10 μL测定，测得丹酚酸B 65.4 mg/g，RSD为1.63%（n=6），表明本测定方法具有良好的重复性。

3.10 准确度试验

3.1 0.1丹参酮ⅡA准确度试验 采用加样回收法，取已知含量样品（110815），精密称定6份，每份0.15 g，分别置6个具塞锥形瓶中，精密加入含丹参酮ⅡA对照品0.366 mg/mL的混合对照品溶液1 mL，按3.3.1项下方法制备，进样5 μL测定，测得丹参酮ⅡA回收率 99.28%，RSD= 1.37%（n=6）。

3.1 0.2丹酚酸B准确度试验 采用加样回收法，取已知含量样品(110815)，精密称定 6份，每份0.1 g，分别置6个具塞锥形瓶中，精密加入含丹酚酸B对照品6.54 mg/mL的混合对照品溶液1 mL，按3.3.2项下方法制备，进样10 μL测定，测得丹酚酸B回收率99.02%，RSD=1.74%（n=6）。

3.11 样品测定

3.1 1.1丹参酮ⅡA精密度试验 取3批样品（110815、110816、110917），按 3.3.1项下方法制备，分别精密吸取5 μL注入液相色谱仪，测定样品中丹参酮ⅡA含量。结果，3批样品的丹参酮ⅡA含量分别为2.44、2.47、2.42 mg/g。

3.1 1.2丹酚酸B精密度试验 取3批样品(110815、110816、110917），按 3.3.1项下方法制备，分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测定样品中丹酚酸B含量。结果，3批样品的丹酚酸B含量分别为65.4、65.1、65.6 mg/g。

4 讨论

石菖蒲、丹参、赤芍、郁金和冰片的薄层色谱鉴别方法操作简便，结果准确，重现性好，斑点清晰，阴性无干扰。丹参占处方药量比例最大，为处方总量的1/4以上，因此，控制丹参的质量能确保偏瘫康胶囊的临床疗效。丹参药材按中国药典2010年版（一部）丹参含量测定项下检验，含丹参酮ⅡA 0.27%、丹酚酸B 7.2%。偏瘫康胶囊的规格为0.35 g/粒，处方1 000粒胶囊所含的丹参药材量为334 g，本研究测得胶囊内容物含丹参酮ⅡA 0.244%和丹酚酸B总量为6.54%，经过计算，与丹参药材 (含丹参酮ⅡA 0.27%、丹酚酸 B 7.2%)比较，丹参酮ⅡA和丹酚酸 B的转移率均为95%以上，说明胶囊中丹参酮ⅡA和丹酚酸B基本提取完全。实验结果表明，本研究测定丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量的方法稳定性、重现性好，精密度、回收率都较满意，因此，能有效控制偏瘫康胶囊的质量。

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Study on the Quality Standards of Piantankang Capsules

Jiang Nan(Hospital of Traditional Chinese Medicine of Hengyang City,Hunan Hengyang 421001,China)

Objective:To establish the quality standards of Piantankang capsules.Methods:Acori Tatarinowii Rhizoma,Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma,Paeoniae Radix Rubra,Curcumae Radix and Borneolum Syntheticum were identified by TLC.The contents of tanshinoneⅡA and salvianolic acid B in the preparation were determined by HPLC.Results:Acori Tatarinowii Rhizoma,Salviae Miltiorrhizae Radix Et Rhizoma,Paeoniae Radix Rubra,Curcumae Radix and Borneolum Syntheticum could be identified by TLC.The linear range of tanshinoneⅡA was 0.032-0.32 μg (r＝ 0.999 9),and the average recovery was 99.28% (RSD=1.37%,n＝6).The linear range of salvianolic acid B was 0.56～5.6 μg (r＝0.999 9),and the average recovery was 99.02% (RSD=1.74%,n＝ 6).Conclusion:The quality of piantankang capsules could be controlled effectively with the established quality standards.

Piantankang Capsules；Quality Standard；TLC；HPLC

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.03.006

2011-11-18）

江南，男，主管药师。研究方向：质量标准和临床药学。E-mail：jiangnan_1977@163.com