王儆等

[摘要]目的：成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体。方法：从pGBKT-SFRP2质粒中扩增SFRP2基因，将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV。用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPARγ2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞，成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2，确定转染效率。原代培养增生性瘢痕成纤维细胞，利用Ad-SFRP2感染该细胞。通过RT-PCR和Western Blot分别检测感染后人瘢痕成纤维细胞及对照组细胞中SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平。结果：RT-PCR检测结果显示腺病毒Ad-SFRP2的PCR产物约为904bp，SFRP2 mRNA表达水平明显增高；用抗SFRP2多克隆抗体进行Western blot检测为阳性，感染的重组腺病毒载体在人瘢痕成纤维细胞中SFRP2蛋白有较高的稳定表达。结论：成功构建含有人SFRP2基因的重组腺病毒Ad-SFRP2；它可有效提高人增生性瘢痕成纤维细胞中SFRP2基因的表达水平。

[关键词]SFRP2；腺病毒；增生性瘢痕；成纤维细胞

[中图分类号]R318[文献标识码] [文章编号]1008-6455（2012）11-1981-04

成纤维细胞作为创伤愈合时的主要效应细胞，在包含增生性瘢痕和瘢痕疙瘩在内诸多以过度增生为特征的病变中，常常表现为凋亡抑制，进而引发一系列连锁反应造成创面修复失控并最终导致过度纤维化而形成增生性瘢痕[1]。我们过去运用从基因芯片中筛选出一个具有抑制细胞凋亡作用、在早期增生性瘢痕中呈显著高表达的基因SFRP2[2-3]，该基因可能在增生性瘢痕形成的过程中起着重要作用。但是目前SFRP2调控增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制尚不明了，有必要进行进一步研究。

本实验利用pAd-Easy腺病毒载体系统[4]，通过PCR扩增SFRP2基因，克隆到腺病毒载体pAdEasy共转染293细胞，构建携带SFRP2基因的重组腺病毒，在体外感染人增生性瘢痕成纤维细胞以观察SFRP2基因表达情况，为进一步研究该基因的功能奠定理论和实验基础。……