山西大学生命科学学院 王兴华

兰州交通大学化学与生物工程学院 孙 盈

纤维素酶广泛存在于自然界的生物体中（Mandels，1976）。从自然界分离筛选新的纤维素酶高产菌株，可为生产高活性纤维素酶提供新菌种或酶基因（闫峰等，2009）。本试验从山西大学校园内采集各种树木和灌木丛下的土样，菌种经初筛和复筛及紫外诱变，以旨得到纤维素酶高产菌株。

1 材料与方法

1.1 原料及仪器

1.1.1 主要试剂 DNS试剂，羧甲基纤维素钠，新华定性滤纸，葡萄糖标准溶液，柠檬酸缓冲液。

1.1.2 主要仪器 721可见分光光度计 （上海佑科仪器仪表有限公司），电子天平JA1203N（上海精密科学仪器有限公司），手提式高压蒸气消毒器YXQSG46-280型（辽宁省丹东市日用五金厂），台式恒温箱振荡器THZ-82A型（上海跃进医疗器械有限公司），干燥箱101-2型（中华人民共和国上海实验仪器总厂），水浴锅（北京市长风仪器仪表公司），离心沉淀器80-2型（上海手术器械厂），显微镜（奥林巴斯）。

1.2 培养基

1.2.1 发酵培养基 羧甲基纤维素钠 （CMCNa）8 g，Na2HPO42.5 g，KH2PO41.5 g，蛋白胨 2.5 g，酵母膏 0.5 g，水 1000 mL，调节 pH 7.0～7.2。

1.2.2 保存培养基（PDA培养基） 马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1000 mL，pH自然。

1.2.3 刚果红-羧甲基纤维素琼脂培养基 （叶姜瑜，1997）。

1.3 菌种的筛选

1.3.1 土样采集 在山西大学校园内采集各种树木和灌木丛下，距土地表面5 cm处的混有枯枝及落叶的土样，共10份。

1.3.2 菌种的初筛 将不同稀释倍数的样品溶液涂布于1.2.3培养基上，30℃培养3～5 d，挑选HC（透明圈直径与菌落直径之比）大的菌落，保藏于PDA培养基斜面，以备复筛。

1.3.3 菌株的复筛 从PDA斜面培养基上挑取初筛菌种，按一定的接种比接入发酵培养基上进行发酵培养，30℃恒温培养4 d后测其纤维素酶活，重复3次取平均值。……