魏民巍，郑赛晶，孟庆乃，金永明，周 昆，胡利民

(1.天津中医药大学中医药研究院，天津市中药药理学重点实验室，天津 300193;2.上海烟草(集团)公司技术中心，上海 200082)

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是具有气流受限特征的呼吸系统常见疾病之一，其发病率和病死率逐年攀升。因出现气流受限且不完全可逆，呈渐进性进展，导致患者肺功能减退，劳动能力和生活质量下降，严重可致残，甚至死亡[1]。目前普遍认为吸烟是COPD的重要诱因[2]，而慢性气道炎症则是其重要的发病机制。有研究认为卷烟能通过诱导气道上皮细胞产生炎性因子，激活相关通路，继而诱导气道黏液蛋白基因(MUC5AC)高表达[3],气道黏液高分泌可加速患者肺功能下降。为降低吸烟造成的损伤，我们在烟草配方中添加中药成分提取液，制成卷烟。通过使用烟气悬凝物刺激人类支气管上皮细胞16HBE，建立细胞染毒模型，观察中药添加剂对卷烟诱导16HBE细胞TNF-α、IL-8及MUC5AC mRNA表达的影响，为中药添加剂在卷烟中应用提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料 RPMI 1640培养液、胎牛血清、青链霉素为HyClone产品；0.25% EDTA-胰蛋白酶，Sigma；CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒，日本同仁；TNF-α、IL-8 ELISA试剂盒，RD分装。RNA提取试剂盒，TIANGEN；cDNA合成、RT-PCR试剂盒，Applied Biosystems 公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养方法 人类支气管上皮细胞系16HBE(来源中国医学科学院肿瘤细胞库)用含10%胎牛血清，100 U/mL青霉素，100 μg/mL链霉素的RPMI 1640培养基，在37 ℃，5% CO2培养箱中培养。3～4 d传代1次，隔天换液。

1.2.2 中药添加剂卷烟及烟气悬凝物(CSC)的制备 本实验所用卷烟由上海烟草(集团)公司提供。中药添加剂卷烟制法如下：将生药材回流提取后减压浓缩，至生药材与浸膏之比为1∶1，加入浸膏3倍体积量的95%乙醇，24 h后抽滤，取上清液减压浓缩至稠膏。……