冯 浩，余凤云，单凤娟，马 婷，闫达中

(武汉工业学院生物与制药工程学院，湖北 武汉 430023)

构建食品级表达纳豆激酶的乳酸乳球菌重组菌株

冯 浩，余凤云，单凤娟，马 婷，闫达中*

(武汉工业学院生物与制药工程学院，湖北 武汉 430023)

构建整合型表达载体pFY008，以HisH基因作为同源重组的靶位点，通过同源重组将含有纳豆激酶原基因的表达盒PnisA-aprN整合到乳酸菌的基因组上，实现纳豆激酶在乳酸乳球菌中食品级的表达。构建的食品级基因工程菌安全性高、稳定性好，并赋予了其溶栓的功能。

纳豆激酶；同源重组；乳酸乳球菌

纳豆激酶(nattokinase，NK)是从日本传统食品纳豆中分离到的、具有高效溶栓活性的蛋白激酶，它能够很好地弥补传统溶血栓药物的缺陷，极有可能开发为新一代口服制剂用于血栓性疾病的预防和治疗。1992年Nadamura等[1]采用鸟枪法首次从分泌纳豆激酶的枯草芽孢杆菌中克隆到包括调控序列在内的纳豆激酶全长基因aprN，并对1473bp的aprN编码序列进行分析。纳豆激酶是分子质量较小的单链蛋白，易被人体吸收；并可以直接降解交联纤维蛋白，且对纤维蛋白原不敏感，而且能促进内源性t-PA(tissue-type plasminogen activator)增生[2]，药效时间长，价格低廉；有一定的抗胰酶水解能力，可由肠吸收入血，口服效果好，具备一定的抗凝血功能，安全性高。纳豆激酶很好地弥补了传统溶血栓药物的缺陷，极有可能作为新一代口服制剂用于血栓性疾病的预防和治疗。

近年来，纳豆激酶作为功能性食品、食品添加剂和普通食品发展的十分迅速。……