冯成利， 项 琪， 张齐好， 杨 艳， 柯 实， 黄亚东，， 苏志坚，△

(1陕西省动物研究所，陕西西安710032;暨南大学2广东省生物工程药物重点实验室，3基因工程药物国家工程研究中心，广东广州510632)

人角质细胞生长因子(human keratinocyte growth factor，hKGF)属于成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors，FGFs)超家族，是一种具有刺激胚胎发育、促进上皮细胞增殖和迁移及调节机体免疫等重要生物学功能的细胞生长因子［1－2］。hKGF由间质细胞所产生，以旁分泌方式特异性作用于上皮细胞［3］。与其它能与肝素结合的成纤维细胞生长因子不同的是，hKGF对成纤维细胞、内皮细胞及黑色素细胞没有促增殖作用［2－3］。大量的研究表明，hKGF是FGFs家族中对皮肤角质形成细胞最有效的促细胞分裂因子，其通过刺激伤口重新上皮化、增厚表皮及激活蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)信号通道抑制细胞凋亡来预防和修复［4］。因此，现时hKGF已广泛应用于角膜损伤修复和皮肤创伤愈合，并在肺损伤修复、胃肠道修复、构建人工皮肤和辐射防护等方面具有潜在临床应用前景［5－6］。鉴于hKGF在临床应用上的多用途和重要性，因此利用基因工程方法大量制备，不仅有利于深入研究它的生物学功能，还能满足其在临床中的需要。到目前为止，科研人员已经利用大肠杆菌、植物及哺乳动物细胞中表达hKGF，但低表达量、没有充分糖基化或生产成本高昂使得hKGF规模化生产难以实现［7－11］。本研究以酵母表达偏好的密码子为基础，设计并合成编码hKGF成熟肽的DNA序列，构建重组表达载体，转化入毕赤酵母中表达并优化宿主高密度发酵条件，高效表达具糖基化修饰的重组hKGF。……