徐先增 黄 凯 曾知恒 伍伟锋 刘唐威

广西医科大学第一附属医院心内科 南宁 530021

心房颤动（房颤）是临床上最常见的一种心律失常，发病后可致病死率明显增加［1］。房颤发生后可使离子通道重构，动作电位时程缩短，频率适应性下降，易于房颤维持，即“电重构”［2－3］。2型小电导钙激活钾通道（type 2small－conductance calcium－activated potassium channel，SK2）是钙激活钾通道的一种亚型，人心肌细胞上有表达，参与心肌细胞的复极过程，心房表达多于心室［4］，已有研究证实SK2表达量的变化与房颤有关［5－6］。但目前对于SK2和房颤关系的研究多限于动物实验，本研究以持续性房颤患者为研究对象，目的在于探究人患持续性房颤后SK2的变化在电重构中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院心胸外科住院的风湿性心脏病行二尖瓣置换成形术的患者，持续性房颤23例（房颤组），其中3例既往合并脑栓塞，窦性心律18例（窦律组），取体外循环插管前的新鲜右心耳组织，分两份分别用于逆转录酶联聚合反应（reverse transcription polymerase chain reaction，PTPCR）和免疫组化。取材前患者签署知情同意书，且获得医院伦理委员会同意。

1.2 RT－PCR （1）总RNA提取：按1mL Trizol（Invitrogen公司）／100mg心耳组织，分步提取总RNA。（2）逆转录：取1μg总RNA参照逆转录试剂盒（Invitrogen公司）说明书将其中的mRNA逆转录成cDNA。（3）引物设计：用primer 5.0软件设计，由上海生工公司合成。目的基因KCNN2（SK2的编码基因，NCBI编号NM＿021614.2）上游5＇－GGACTGTCCGAGCTTGTG－3＇，下游5＇－TGATGTTCTGGGTCTTTGC－3＇，扩增片段486bp；内参基因GAPDH（NCBI编号NM＿002046.3）上游5＇－AGAAGGCTGGGGCTCATTTG－3＇，5＇－AGGGGCCATCCACAGTCTTC－3＇，扩增片段258bp。（4）PCR反应：反应体系（25μL）包括cDNA 1μL，目的基因上下游引物各0.5μL，内参基因上下游引物各0.5 μL，2×PCR Mix（北京天根公司）12.5μL，去离子水9.5μL；反应程序为94℃5min（94℃30s，62℃30s，72℃30s）×35个循环，72℃10min。（5）电泳及图像扫描：2%琼脂……