于永忠，郭雯，吴欣媛，王金珍，崔玉东

（黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319）

羊口疮（Orf）又称羊传染性脓疱（Contagious Ecthyma）是由羊口疮病毒（ORFV）引起的一种急性的、接触性的、高度嗜上皮性传染病，该病以在绵羊、山羊等动物的口唇、舌、鼻、乳房等部位形成丘疹、水疱、脓疱和结成疣状结痂为特征，主要引起皮肤和黏膜的增生性病变[1-2]。目前，该病几乎分布于世界所有养羊的国家和地区，同时也有人员感染的报道[3-4]。由于Orf在防治上缺乏有效的疫苗，而RNA干扰技术可能成为的抑制目的基因表达，控制病毒复制的有效手段。1998年，Fire等人发现dsRNA（Double strand RNA）能够比反义RNA或顺义RNA更有效地关闭基因的表达，称这种现象为RNA干涉（RNA interference，RNAi）[5]，并推测RNAi可能广泛存在于各种生物体中，是生物进化过程中一种重要防御机制。RNAi作为一种新的基因阻断技术，具有特异、有效的基因沉默效应，能够简单、高效地阻抑特定基因表达，现已广泛用于抗肿瘤，抗病毒的基因治疗，RNAi及其相关的RNA基因沉默机制被认为在抵御病毒入侵和转座子表达中起到关键性的作用[6]。由于在病毒中利用RNAi技术仍需要通过转化载体导入能产生发夹结构RNA（Short-hairpin RNA，shRNA）或dsRNA的表达单位，方便有效的RNAi表达载体的构建成为高效利用RNAi技术的关键。DNA ploymerase基因是ORFV复制的关键性基因，如果对于该基因能够运用RNAi技术加以体内沉默，无疑会为Orf的防控开辟新的思路，由此，研究目的是利用慢病毒载体（Lentiviru vector）pLL3.7包装质粒构建pLL3.7-hsRNA系统，从而为体外获得靶向DNA ploymerase基因的 siRNA（Small interfering RNA）片段重组载体提供实验数据。……