谭君，侯喜林，余丽芸，2，李剑华，王桂华，曹宁

（1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆163319；2.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院；3.大庆油田总医院）

干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）是人体和动物肠道中一种正常的益生菌，被公认为安全级（generally recognized as safe，GRAS）微生物[1]，具有多种生理功能，如控制肠道感染、增加某些食物的营养价值、控制血清胆固醇水平、改善乳糖代谢、诱导体内特异性及非特异性免疫应答以及抗肿瘤活性等功能。因此，干酪乳杆菌可作为安全的口服疫苗和其他病原体的抗原载体[2-5]。乳杆菌在肠道达到一定数量时，可以抑制肠道中及自然界中某些有害微生物的生长。益生菌的一个重要性质指标是对病原菌的抑菌活力[5]。因此实验对表达产肠毒素性大肠埃希氏菌K88抗原的重组基因工程乳酸菌的抑菌性能进行研究，为其口服疫苗的临床应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

菌种：重组K88干酪乳杆菌由黑龙江八一农垦大学基因工程实验室构建并保存；指示菌：猪源金黄色葡萄球菌（S.aureus）由黑龙江八一农垦大学预防兽医学实验室保存，产肠毒素性大肠埃希氏菌（Enterotoxigenetic E.coli，ETEC）C83902株购自中国兽药监察所。

培养基：MRS培养基用于培养乳酸菌；牛肉膏蛋白胨培养基用于培养指示菌。

1.2 乳酸菌上清液的制备

将重组K88干酪乳杆菌接种于液体MRS培养基中，37℃静置培养36 h后，8 000 r·min-1离心10 min，用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌收集上清液，保存于4℃冰箱中备用。

1.3 检测平板的制备

将2种致病菌原菌种接种于肉汤培养基中，37℃恒温箱培养12 h后，用无菌生理盐水稀释成致病菌菌液备用，浓度约为105CFU·mL-1。……