庞有旺 郑季南 洪庆南 方 钧

（解放军泉州第180医院骨科，福建泉州362000）

三叉神经中脑核神经元传递口面部空间位置信息和闭口肌运动信息［1］。三叉神经中脑核向三叉神经运动核的直接投射组成咀嚼运动的单突触反射环路，在调控咀嚼运动中发挥重要作用［2－4］。以往国内、外研究表明大鼠三叉神经运动核内Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体神经终末为三叉神经中脑核中枢突终末［5－7］。本研究应用免疫组织化学染色技术，在光镜下观察了大鼠三叉神经运动核Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体阳性纤维终末在生后发育过程中变化。

材料和方法

本实验共用了18只Sprague-Dawley幼年大鼠和3只成年大鼠。把幼鼠出生日作为newborn、然后依次为生后1d、2d等。newborn、生后3、7、10、14、21d和成年每个年龄段各取3只（非同窝）。在戊巴比妥钠（60mg／kg）腹膜腔注射深麻醉下，先用0.025mol／L磷酸缓冲液配制的生理盐水（PBS，pH7.3）经心脏冲洗血液，至流出的液体无血色，再用50-300ml含0.2%多聚甲醛和75% （v／v）饱和苦味酸的0.1mol／L的磷酸缓冲液（pH7.3）灌注固定15-30min。灌毕立即取脑并浸于含2%多聚甲醛和75%饱和苦味酸的0.1mol／L PBS后固定24－48h（4℃），然后移入含25%蔗糖的0.1mol／L的PB中，4℃过夜。冰冻连续冠状切片，片厚40μm，切片分2套，分别收集于0.05mol／L的PBS中。

第1套切片用于VGluT1免疫组织化学染色。具体步骤如下：（1）用兔抗 VGluT1IgG（0.8μg／ml，日本京都大学金子武嗣先生惠赠）孵育切片过夜；（2）生物素标记的驴抗兔IgG（1∶100，Jackson）室温孵育4h；（3）移入 ABC-Elite（1∶100，Vector）孵育切片3h。其中步骤（1）和（2）用含5%驴血清、0.05%叠氮钠、0.5%Triton X-100和0.25%角叉菜胶的0.05mol／L 的 PBS稀 释，步 骤（3）用 含 0.3%Triton X-100的0.05mol／L的PBS稀释。然后进行DAB反应和双氧水呈色。裱片、脱水透明、DPX封片。光镜下观察并拍照。……