HPLC法测定甲磺酸伊马替尼片的含量

2012-02-02赵海桥刘存领苏贵勇

药学研究 2012年11期

赵海桥，刘存领，付建，苏贵勇

(1.山东方明药业集团股份有限公司，山东东明274500;2.山东大学药学院，山东济南250012; 3.中国药科大学药学院，江苏南京210009)

甲磺酸伊马替尼用于治疗慢性粒细胞白血病(CML)急变期、加速期或α－干扰素治疗失败后的慢性期患者;不能手术切除或发生转移的恶性胃肠道间质肿瘤(GIST)患者。进口药品注册标准JX20040087采用梯度洗脱测定甲磺酸伊马替尼片的含量，需要至少两元泵的液相才能测定，限制了该方法的普遍使用性。本文建立的方法，只需普通的液相就能测定，方法简便，结果可靠。

1 仪器与试药

1.1 仪器日本岛津SPD－10A高效液相色谱仪。

1.2 试药甲磺酸伊马替尼对照品(山东方明药业集团股份有限公司，1102001);甲醇、辛烷磺酸钠为色谱纯;水为纯化水;其他试剂均为分析纯;甲磺酸伊马替尼片(山东方明药业集团股份有限公司;批号:1106001、1106002、1106003;规格:0.1 g)。

2 方法与结果［1］

2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以含0.04%辛烷磺酸钠的20 mmol·L－1磷酸二氢钠溶液(磷酸调至pH 2.5)－甲醇(40∶60)为流动相，流速为1 mL ·min－1，检测波长为268 nm，柱温为30℃，进样量为20 μL。

2.2 对照品溶液的制备取甲磺酸伊马替尼对照品约24 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备取甲磺酸伊马替尼片20片，精密称定，研细，精密称取粉末适量(约相当于伊马替尼20 mg)，置100 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声20 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备根据甲磺酸伊马替尼片的制剂配方，制备不含甲磺酸伊马替尼的阴性对照粉末。精密称取阴性对照粉末适量(约相当于伊马替尼20 mg的量)，按照“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.5 专属性试验辅料干扰试验:分别对阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液进样分析，辅料不干扰甲磺酸伊马替尼的测定。

破坏试验:取甲磺酸伊马替尼片适量(约相当于伊马替尼20 mg)置100 mL容量瓶中，照下述方法试验:①加1.0 mol·L－1盐酸溶液2 mL并放置8 h作为酸破坏样品;②加1.0 mol·L－1氢氧化钠溶液2 mL并放置8 h作为碱破坏样品;③加3%过氧化氢溶液2 mL并放置8 h作为氧化破坏样品;④置4 500 lx光照度下8 h作为光照降解样品;同时做空白及辅料空白试验。结果表明:甲磺酸伊马替尼对酸、碱、氧化剂及光照均较稳定，各降解产物分离度良好。

2.6 线性关系考察精密称取甲磺酸伊马替尼对照品约50.11 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为溶液①，精密量取溶液①2.0、1.0、1.0、1.0 mL，分别置5、5、10、20 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液②、③、④、⑤，按上述液相条件，分别进样20 μL，记录色谱图峰面积。以甲磺酸伊马替尼峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标计算得回归方程为:A=561.32C+ 894.552 7，r=0.999 9。结果表明甲磺酸伊马替尼在25.055～501.1 μg·mL－1浓度范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验精密量取对照溶液20 μL，按上述液相条件，连续进样6次，RSD为1.0%。结果表明，精密度良好。

2.8 重复性试验取同一批号(1106001)样品适量5份，精密量取，按样品测定项下的方法，测定甲磺酸伊马替尼片的含量，RSD为0.84%，重复性良好。

2.9 稳定性试验取重复性实验中的第1份溶液，室温下在0、2、4、6、8 h测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温8 h内稳定，计算得:RSD=1.1%，n=5。

2.10 方法准确度试验在阴性对照粉末中分别加入适量的甲磺酸伊马替尼对照品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，在相当于供试品溶液80%、100%和120%浓度水平下，分别考察加样回收率。每个浓度制备3份。测定3个浓度下的平均回收率分别为99.88%、100.12%、100.95%;RSD (n=3)分别为0.36%、0.88%、0.74%。

2.11 样品测定对批号为1106001，1106002，1106003的甲磺酸伊马替尼片样品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，每批样品制备3份，按外标法计算含量，测得结果与进口药品注册标准比较，结果见表1。