于文静，赵 静，连 波，位晓丹，谢 斌，高志芹

（1.潍坊医学院细胞生物学教研室，潍坊 261053；2.潍坊医学院生物技术实验室，潍坊 261053； 3.潍坊医学院药学与生物科学学院，潍坊 261053）

大肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，病 因尚未明确，但其生长、转移和预后与肿瘤新生血

管生成密切相关，因此，抗肿瘤血管生成成为治疗大肠癌很有希望的途径之一，肿瘤血管生成和抗血管生成治疗的研究前提是建立适合的大肠癌血管生成模型。本研究选用人大肠癌腺癌细胞株HT-29建立鸡胚尿囊膜（CAM）移植模型，并观察其建模后肿瘤血管生成特征。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 人大肠癌腺癌细胞株HT-29，购自中国协和医科大学肿瘤医院肿瘤研究所。

1.1.2 实验试剂 RPMI 1640培养液：solarbio公司生产；灭菌级无支原体新生牛血清：杭州四季青生物工程材料公司；胰蛋白酶：solarbio公司。

1.1.3 种蛋 购自潍坊市第五养鸡场。

1.2 实验方法

1.2.1 肿瘤细胞培养 HT-29细胞生长于含10％灭活新生牛血清的RPMI 1640培养基，培养箱中常规培养。

1.2.2 鸡胚孵育 种蛋常规消毒后，气室端向上，置于温度37.6℃，湿度66％的恒温恒湿培养箱孵育，每天转蛋一次。自制照蛋器验蛋，距离胎头下方0.5～1.0 cm处划定开窗位置，备用。

1.2.3 CAM开窗法将发育良好的8日龄鸡胚置于超净台消毒，用无菌眼科镊在鸡胚气室端开小孔并穿透壳膜，以验蛋划定的开窗位置为中心开1 cm× 1 cm的窗，使用无菌注射器加1滴生理盐水湿润卵壳膜后刺破壳膜，使CAM下塌与卵壳膜分离，去除卵壳膜后暴露CAM，制成假气室，用无菌透明胶带封窗备用。……