李美蓉 李 兴

糖尿病心肌病是糖尿病主要的微血管并发症之一，也是糖尿病患者死亡的主要原因之一。近年来研究显示，氧化应激是糖尿病慢性并发症发生、发展的共同通路。衔接蛋白p66shc在氧化应激信号刺激下参与线粒体活性氧族产生，血红蛋白加氧酶－1(Ho－1)为胆红素降解的限速酶，是一种重要的抗氧化剂，两者变化影响体内氧化应激的状态。脂联素在调节糖、脂代谢和介导各种血管通路中起中心调节蛋白作用，可以通过抑制氧自由基产生，增加抗氧化能力，降低氧化应激。本实验观察了高糖环境下脂联素对心肌细胞p66shc、Ho－1表达的变化，旨在探讨脂联素对心肌细胞的保护作用。

材料与方法

1.材料:人心肌细胞购于美国SinceCell公司，经过形态学及细胞染色法鉴定。DMEM、0.25%胰蛋白酶、D－葡萄糖、青霉素链霉素(Sigma公司)，胎牛血清(杭州四季青)、人重组脂联素(PEPRO TECH公司)、SOD、MDA试剂盒(南京建成生物公司)、Trizol试剂(Initrogen life technologies公司)、SYRB Green Mastar(Roche公司)、AnnexinV－FITC/PI(南京凯基公司)。

2.方法:(1)实验模型制作:人心肌细胞在37℃、5%CO2条件下以10%胎牛血清低糖(5.5mmol/L)DMEM培养基培养于25cm2培养瓶中。实验时，以无血清低糖DMEM饥饿培养细胞12h，待细胞生长至85%融合状态时，按以下方法分组:①对照组(N组):D－葡萄糖浓度5.5mmol/L;②高糖组(H组):D－葡萄糖浓度30mmol/L;③高糖+脂联素组(A组):D－葡萄糖浓度30mmol/L+脂联素浓度2.5μg/L。分别干预24、48、72h。(2)上清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)检测:分别用黄嘌呤氧化酶法检测SOD的含量和活性，用代巴比妥酸法检测MDA的含量。将细胞分为上述3组，每组设置24、48、72h 3个时间点，取每组每个时间点培养瓶中的上清液，密封后于－20℃保存。……