苗延萍

吉林省吉林市吉林鹿王制药股份有限公司，吉林 吉林 132013

蟾蜍俗称癞蛤蟆，是中国东北地区常见的两栖类动物。在我国主要为中华大蟾蜍与黑眶蟾蜍两种，能够吞噬害虫，保护农作物，也是传统中药的重要组成部分。《本草别录》认为，蟾蜍味辛，性凉，有毒。它还是中药六神丸的主要成分之一，但是盲目食用会发生生命危险。当前虽然因为环境改变和污染等原因，导致蟾蜍数量大为减少，但是在一些偏远农村依然大量存在。学术界一致认为蟾蜍的毒液蟾酥对恶性肿瘤有很好的治疗作用。根据蟾皮的一些特性，目前有效成分的提取主要是采用乙醇加热回流方法。采用TLC和HPLC进行定性鉴别和含量测定，操作简便，迅速和灵敏度高，重现性也很好，明显优于其他的提取和检测方法［1］。目前已经有含有蟾蜍有效成分的药物用来治疗恶性肿瘤的报道。目前对蟾蜍提取物的研究比较多，对这一领域的开发利用还有很大前景。

1 蟾蜍提取物工艺研究

有报道显示蟾皮优化工艺为水煎煮2次，第1次加10倍量的水浸泡1 h，煎煮45 min，第2次加8倍量的水，煎煮45 min。结论:该工艺合理，蟾皮中吲哚类总生物碱的提取率较高，更适合于工业化大生产［2］。也有报道显示超声法提取蟾皮中蟾蜍噻咛的最佳工艺条件为50%乙醇，pH值为4的酸性溶液，温度50℃，固液比为1∶15，提取时间为60 min，功率100W。与传统水加热回流提取法相比，缩短了提取时间，降低成本，并有良好的蟾蜍噻咛提取率［3］。也有报道用超高效高压液相色谱－紫外检测器进行检测，发现干蟾皮中蟾毒内酯类成分的最佳提取工艺为以10倍量80%乙醇提取2次，每次2 h［4］。目前有报道利用近红外透射光谱分析技术，可以实现蟾皮提取液浓缩过程中密度、含水率和吲哚类生物碱浓度这3个关键质控指标的同时快速检测［5］。蟾蜍提取物蟾蜍噻咛的含量很不稳定，并有很大的差异，中华大蟾蜍人工饲养的皮中含有蟾蜍噻咛，而野生的中华大蟾蜍皮研究发现不含蟾蜍噻咛［6］。

2 蟾蜍提取物实验研究

甘草苷与适量蟾酥内酯等制成的蟾苷提取物，发现蟾苷提取物的抗病毒作用接近甚至强于黄芪及盐酸胍，发现其体外抗病毒活性和体内抗病毒活性都接近或强于对照药物［7］。应用一定浓度的蟾苷提取物作用于被腺病毒感染的细胞，以MTT法测定细胞存活率，显示:用药后的细胞存活率明显高于病毒对照组，并能抑制病毒在细胞内的繁殖［8］。中华大蟾蜍蟾酥、蟾皮、蟾衣脂溶性及水溶性提取物，均可抑制心肌细胞膜的Na+－K+－ATP酶、Ca2+－ATP酶和Mg2+－Ca2+－ATP酶活性，作用较强的有蟾皮水溶性成分和华蟾素［9］。有研究结果表明华蟾酥毒基在兔体内代谢速度极快，可能由于草食性动物血浆中所含的特异酶有关，华蟾酥毒基在动物体内迅速代谢为去乙酰基华蟾，为其主要代谢产物，体内代谢参数有待做进一步的研究［10］。而有学者报道大蹼铃蟾蛋白提取物对多个膀胱癌细胞株具有直接细胞杀伤作用，其作用机制不通过抑制端粒酶活性［11］。

3 小结

蟾蜍目前人工饲养的技术已经成熟，可以为研究和制药提供大量的产品。蟾蜍在我国中成药的使用比较广泛，含有蟾酥的中成药有六神丸、喉症丸等等。不当使用导致中毒的表现为循环系统病变，临床上心电检测常显示房室传导阻滞等心电图。严重时患者血压下降和休克，甚至心跳骤停导致死亡，临床医生使用含蟾蜍提取物的中药一定要小心谨慎，而患者更不可盲目服用。目前蟾蜍的各种提取分离方法很多，不同的技术方法得到的成分也不同。水煎煮是普遍的方法，技术和设备要求非常低，但是提取效果并不理想，基本上是包含各种成分的总提取物。而利用高科技手段提取有效成分应当是各级研究和制药企业的工作重点，蟾蜍提取物的研究是新药开发的重要方向之一。目前中药研究手段日益多样化，蟾蜍提取物的一些化学成分和临床应用效果是开发重点，但是要注意消除毒性提高药效，一些蟾蜍提取物对疾病的治疗机制并不明确，而不良反应也不明确，还需要有责任心的研究人员更加深入研究。

［1］黄玉叶，宋霄宏．蟾皮的提取和含量测定及临床应用研究进展［J］．中华中医药学刊，2011，29(7):1636－1638．

［2］高波，黄雪艳．蟾皮提取工艺的研究［J］．安徽中医学院学报，2002，21(5):51－52．

［3］张国平，张晓萍，张晓嫚，等．蟾皮中蟾蜍噻咛的超声提取工艺研究［J］．时珍国医国药，2011，22(8):1904－1905．

［4］昝日增，胡万杨，黄玉叶，等．干蟾皮中蟾毒内酯类成分的提取工艺研究 ［J］．中草药，2011，42(7):1330－1333．

［5］金叶，吴永江，刘雪松，等．蟾皮提取液浓缩过程中吲哚类生物碱等多指标近红外快速检测研究［J］．中国药学杂志，2012，47(9):712－717．

［6］杨立宏，金向群，张薇．中华大蟾蜍化学成分研究［J］．沈阳药科大学学报，2000，17(4):292－295．

［7］曹悦群，孙非，张淑芹，等．蟾苷提取物抗流感病毒的实验研究［J］．吉林中医药，2003，23(9):47－48．

［8］张淑芹，曹悦群，孙非，等．蟾苷提取物抗腺病毒的实验研究［J］．长春中医学院学报，2003，19(4):43－44．

［9］陈才法，缪进，李景辉，等．蟾酥、蟾皮、蟾衣提取物对心肌细胞膜ATP酶的影响［J］．四川动物，2008，27(3):393－395．

［10］刘冬，杜守颖，何秀峰，等．蟾酥提取物中2种蟾蜍甾烯类成分兔体内药代动力学研究［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(21):135－138．

［11］申吉泓，黄翔，李文辉，等．大蹼铃蟾蛋白提取物对膀胱癌细胞株的抑制作用及对端粒酶的影响［J］．中国药理学通报，2002，18(2):136－1388．