严之红 郭威早 佟 倩

(航天中心医院高干二科，北京 100049)

缺血再灌注(IR)损伤是脑血管疾病组织损害中核心病理因素之一〔1〕。研究显示，细胞外调节激酶(ERK)信号通路在IR损伤的修复机制中具有重要作用〔2〕，而脑源性神经营养因子(BDNF)对神经损伤的保护作用亦获得了明确的实验依据，并且这种保护作用的分子机制与ERK信号通路关系密切〔3〕。然而，BDNF和ERK信号通路在IR损伤中的关系目前尚不明确。本文旨在研究BDNF在IR损伤中的神经保护作用及其与ERK信号传导的关系。

1 材料与方法

1.1 IR损伤动物模型 体重250 g左右的健康雄性SD大鼠被随机分为A、B、C三组，每组6只，所有的大鼠均经历脑局灶性缺血再灌注过程。MCAO缺血再灌注参考文献〔4〕报道并作适度改良，具体操作方法:以10%(w/v)水合氯醛按400 mg/kg的剂量经腹腔注射对大鼠实施麻醉。在大鼠颈部中线由下颌至胸骨实施切口，将颈部肌肉向旁剥离以便暴露颈总动脉。将Dermalon 3-0号单纤维手术缝线末端用炽热前状态的金属片烙约1 s，使末端钝化，然后在距末端20 mm处标记。双侧颈总动脉以微型血管夹断流，在右侧颈内动脉和颈总动脉的分叉附近切口，将端头钝化处理的手术线插入，沿颈内动脉上行约20 mm，遇阻力后即停止。脑缺血状态持续45 min，然后将微型血管夹和手术缝线撤除，使再灌注保持12 h。

1.2 BDNF的应用及ERK信号通路的阻断 冷冻干燥的BDNF蛋白结晶和选择性Raf-1抑制剂均由美国国立精神卫生研究所生物标记实验室赠送。将BDNF溶于pH7.4磷酸盐缓冲液配成1μg/μl的溶液备用。将Bay 43-9006溶于二甲基亚砜(DMSO)配成5 ng/μl的溶液备用。……