王建龙 李海涛 苏丕雄 顾 松 刘 岩 张希涛 颜 钧 安向光

高 杰2 辛 悦2 蔡 军2*

(1.北京市普仁医院心内科，北京100062;2.首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心，北京100020)

DNA甲基化是表观遗传学的重要机制之一。DNA甲基化与生长、发育等生命活动及肿瘤等疾病的形成息息相关。目前DNA甲基化在肿瘤发生中的作用仍是研究的一个热点，而关于其在心血管疾病发生过程中作用的研究则刚刚起步［1］。本实验用甲基化芯片筛选的方法分析心衰心肌标本和正常心肌标本中DNA甲基化的差异。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1)主要试剂：dNTP-mix购自美国Invitrogen公司; Platinum-DNA-Polymerase购自美国 Invitrogen公司;Invitrogen凝胶回收试剂盒购自美国Invitrogen公司; DNA ladder购自美国 Invitrogen公司;MethylCodeTMBisulfite Conversion Kit购自美国Invitrogen公司;EZ DNA Methylation-Gold Kit购自美国ZYMO Research公司;质粒小量提取试剂盒购自美国 Axygen公司; pMD18-T购自宝生物(大连)有限公司;Takara Total-Prep RNA扩增试剂盒购自美国Illumia公司。

2)主要仪器：离心机(5810R/5415D)购自美国Eppendorf公司;PCR仪购自美国ABI公司;电泳仪购自美国 Bio-Rad公司;Infinium HumanMethylation27 BeadChip购自美国Illumina公司;HumanHT-12 v4 Expression BeadChip购自美国Illumina公司;实时荧光定量PCR仪(48孔)(TC988型)购自沈阳永鑫益实验仪器销售有限公司;Illumina BeadChip Reader扫描仪(HiScanSQ)购自美国Illumina公司;RNase-Free冻存管购自美国Corning公司;海尔－80℃冰箱 (DW-86L386)购自青岛海尔公司。

3)实验材料：选取2008年至2009年首都医科大学附属北京安贞医院心脏外科收治的心脏移植患者作为研究对象，本实验分正常对照组和疾病组，其中正常组8例取自心脏移植供体左心室心肌，疾病组14例均取自心脏移植患者自身心脏左心房心肌。所有标本采样时液氮中速冻后保存于 －80℃ 冰箱中，并使用液氮运输。该实验通过相关医院伦理委员会批准。……