段圣亮，陆晔，田桢干，王桂江

1. 中国人民解放军防化指挥工程学院，北京 102205； 2. 上海出入境检验检疫局，上海 200335

生物恐怖袭击的威胁及其可能造成的灾难一直是国家安全与公共卫生关注的焦点[1]。细菌类生物恐怖病原体毒性强、传染性高、对外界环境的抵抗力强，且较易投放。如炭疽芽胞杆菌、布鲁菌、鼠疫杆菌等都可能作为病原体用于生物恐怖袭击，且它们生存的基质多样化。因此，在国境口岸建立有效、快速、安全的生物恐怖病原体检测技术至关重要。

炭疽芽胞杆菌属需氧芽胞杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类炭疽病，并在环境中造成广泛污染。由于其芽胞对外界环境具有极强的抵抗力，造成的环境污染常持续存在；而传统的培养鉴定法用时较长，检出率低[2-6]。因此，准确、快速检测炭疽芽胞杆菌具有十分重要的意义。本研究应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)技术建立一套检测炭疽芽胞杆菌的方法。其原理是根据炭疽芽胞杆菌特异性基因序列设计内引物、外引物各1对，或再增加环状引物1对，特异性识别靶序列上的独立区域，利用Bst酶启动循环链置换反应，在特异性基因序列启动互补链合成，在同一链上互补序列形成有很多环的花椰菜结构茎-环DNA混合物。从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物(焦磷酸镁)，形成乳白色沉淀，加入显色液后即可通过颜色变化观察及判定结果[7，8]。

1 材料和方法

1.1 引物设计

PA基因是炭疽芽胞杆菌保护性抗原基因[9-11]，针对PA基因设计引物，见表1。……