刘凤琴 廖博 刘丽萍 颜新星

甲胎蛋白(AFP)是一种血清糖蛋白，半寿期5天，电泳时位于白蛋白和α1球蛋白之间。当患肝细胞癌、卵黄囊和胚胎样肿瘤及部分肝外肿瘤时机体可重新合成，是目前比较有价值的诊断肝癌和生殖细胞肿瘤的重要指标。收集临床2010年1月至2012年5月收治的临床甲胎蛋白(AFP)检测患者120例临床检测方法与临床意义进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集的120例，其中男74例，女46例，年龄26～80岁，平均46岁。其中原发性肝癌80例，肝硬化22例，急性肝炎10例，慢性肝炎3例;所有病例均经实验室检查、影像、肝穿活检及手术病理等确诊。

1.2 方法

1.2.1 试剂与标本 用抗AFP单抗体包被，酶结合物溶于缓冲液中，含蛋白稳定剂。2～8℃保存，有效期内保持稳定。显色液A0.05M乙酸缓冲液，含0.02%过氧化氢，存于滴瓶中。显色液B含色素基质和稳定剂，存于滴瓶中。2～8℃保存，有效期内保持稳定。标本仅限于人血清，血浆或再钙化的血浆。血清标本必须由用标准静脉穿刺技术采集的全血中分离得到。不立即使用的标本应冷藏于2℃ ～8℃。若贮存期超过3天，须冰冻保存(-20℃)［1］。若标本需运送，则按国家有关病原试剂运输的规定包装。标本中含有沉淀会导致实验结果不一致。分析前需将标本澄清。含有大量的脂血、溶血或浊度大的血清不能使用。

1.2.2 操作 采用ELISA双抗体夹心法。自试剂盒中取出已包被抗AFP抗体的微孔反应板条，平衡至室温(18～25℃)，配制相关试剂。将待测血清用样本稀释液做1:10稀释，每孔加100μl。37℃l小时后洗涤5次。将AFP标准品稀释成 3、6、12、25、50、100 ng/ml，分别加至微孔中，每孔 100 μl。设置空白孔、阳性对照孔和阴性对照孔。各孔加酶(HRP)标记抗 AFP抗体100 μl(空白孔不加)，37℃ 1小时后洗5次。控干孔内液体后加入酶底物/色原溶液，每孔100 μl，37℃避光反应 15 min，显色。每孔加 2 mol/L H2SO450 μl终止反应。用酶联仪在相应波长测吸光度。

2 结果

对AFP标准稀释系列浓度为横轴，吸光度为纵轴，建立标准剂量反应曲线;根据上述标准剂量曲线采用点对点得到待测标本的AFP含量，或采用线性回归得到待测标本的AFP含量。原发性肝癌患者血清AFP阳性率为75%～80%。其他恶性肿瘤，如胚胎细胞瘤、胃癌、胆道癌、胰癌和肺癌也可增高。

3 讨论

AFP是胚胎发育早期的一种主要血清蛋白，成人由肝细胞产生，含量极微。AFP有很强的免疫抑制功能，肝细胞癌患者血清AFP升高，但有30%患者AFP在正常范围内。少数其他肿瘤患者AFP也可呈阳性。检查AFP的常用方法有反相间接血凝法、放射免疫法、火箭电泳法、ELISA法，ELISA法灵敏度高，操作简便，易于推广。ELISA法采用ELISA双抗体夹心法。用抗AFP抗体包被微孔板，分别将待测样本、标准品及阳性、阴性对照加至包被孔中，反应后加入酶结合物(HRP－抗AFP单克隆抗体)，使特异性地形成固相抗AFP抗体－AFP－酶标抗AFP抗体复合物，再加入酶底物/色原呈色。呈色程度与测定范围内的样本中AFP浓度成正比。样本在离心前，须凝固充分。不要使用在室温下放置超过8h的样本。质控物、定标液分装后，只能冻融一次，不能多次的溶解、冰冻、反复使用，不能储存在冰箱的自动除霜的冰格中，以免影响测试值。每次勿加入过多的比色杯，不要用手触摸，易产生静电，导致进杯的入口和出口或轨道内堵塞。放试剂时应注意是否有气泡，且混匀的时间不易过长，执行手工稀释。

原发性肝细胞癌患者血清中AFP明显升高，血清AFP水平升高超过400ng/ml持续4周或200～400ng/ml持续5周以上，在排除其他因素后，综合影像学检查，高度提示为肝细胞性肝癌，AFP可用于肝癌高危人群的普查和随访，对于肝癌的诊断、鉴别与疗效观察有价值;但也有20% ～30%患者可无AFP升高，值得注意。病毒性肝炎、酒精性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化患者AFP可呈中、低水平或暂时性增高［2］。AFP升高主要是由于受损伤的肝细胞再生而幼稚化时，肝细胞便重新具有产生AFP的能力，随着受损肝细胞的修复，AFP逐渐恢复正常。

［1］覃慧钰.血清肿瘤标志物在肝癌诊断中的应用.中华肝脏病杂志，2005，13(5):379-380.

［2］赵恒，廖静，刘瑜，等.甲胎蛋白与肝癌.临床肝胆病杂志，2008，24(5):385-387.