结核分枝杆菌ESAT6－Rpf E亚单位疫苗的构建与免疫原性研究

2012-01-24李志达泽蛟章国平李瑞营刘万波苏娟张颖祝秉东

中国防痨杂志 2012年3期

李志达泽蛟章国平李瑞营刘万波苏娟张颖祝秉东

结核病（tuberculosis，TB）是由 Mtb引起的疾病，据2009年世界卫生组织报道，每年约940万例患者中180万例死于此病。并且Mtb和HIV双重感染的出现，使TB的防治更加困难。BCG作为惟一有效的TB疫苗［1］，虽然广泛应用于新生儿的TB防治，但是不能有效阻止成人肺结核的发生［2］；同时环境分枝杆菌、寄生虫的感染都会影响BCG的效果［3－4］。因此，迫切需要发展更加有效的预防性和治疗性的TB疫苗［5］。亚单位疫苗组成成分明确、使用安全［6］，不受环境分枝杆菌的影响［7］，能诱导有效的免疫应答。由于亚单位疫苗的免疫保护效果难以超过BCG［8］，采用BCG初始免疫－亚单位疫苗增强免疫的策略，可以提高成人的免疫效果［9－10］，同时符合我国新生儿预防接种BCG的国情。

结核病难以彻底治愈的重要原因是Mtb能以休眠状态存在于宿主体内，并保持持久活性［11］。复活促进因子（resuscitation－promoting factor，Rpf）最初在藤黄微球菌（M.luteus）中发现，该因子可以促进休眠菌的复苏和生长。经杂交试验证实Rpf基因也存在于多种分枝杆菌中。Mtb含有5个Rpf样基因：rpfA （Rv0867c）、rpfB （Rv1009）、rpfC （Rv1884c）、rpfD （Rv2389c）和rpfE （Rv2450c）［12］。有文献报道Rpf蛋白引起的免疫应答可有效抵抗Mtb的激活［13－14］，其中 Rpf E蛋白对 C57BL/6小鼠有免疫保护作用［15］；重组Rpf E蛋白对BCG休眠菌有促生长作用［16］。联合不同时相表达的蛋白所制成的融合蛋白疫苗［17］，可用于TB的预防和治疗。本实验同时也选择了 Mtb感染早期分泌性蛋白 ESAT 6［18－19］。ESAT6编码基因位于RD1区，全长288 bp，BCG中缺乏，仅存在于有毒力的 Mtb中［20－21］。