都伟欣 董娜 陈保文 徐苗 杨蕾 卢锦标 沈小兵 王国治

随着疫苗临床应用中不良反应报道越来越多，疫苗研发过程中的安全性评价日益引起人们的重视。由于疫苗的作用机理是引起机体免疫系统的应答，故疫苗接种后的多数不良反应是由免疫系统引起的毒性反应［1］。为了保证疫苗在人体应用的安全性，我国从2002年开始要求新型疫苗作临床前的免疫毒性分析。

疫苗的免疫毒性主要包括：免疫抑制、超敏反应和自身免疫三大类。但其中超敏反应最为常见，而超敏反应中又以Ⅰ型过敏反应最为常见与凶险。Ⅰ型过敏反应多为全身性反应，目前对其评价大多依靠全身主动过敏试验和被动皮肤过敏试验，所用的实验动物模型仍多为大鼠和小鼠。但这些方法均主观性较强，并且难以量化。而豚鼠是公认的对致敏物质比较敏感的动物，并且与人类Ⅰ型过敏反应发病状态较为接近［2－3］。本研究以豚鼠为过敏反应动物模型，初步建立了评价Ⅰ型过敏反应的几种量化检测指标和方法，并将建立的方法初步应用到结核病新疫苗（耻垢疫苗）的免疫毒性评价中。

材料和方法

一、材料

1.试剂和耗材：鸡卵清白蛋白（ovalbumin，OVA）和 Al（OH）3（0.5 mg/ml）由北京生物制品研究所惠赠。羊抗豚鼠IgG1抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗豚鼠IgG1抗体购于Ab D Serotec公司。四甲基联苯胺（TMB）底物显色液购于Amresco公司。豚鼠淋巴细胞分离液购于天津灏洋生物。Hank液、刀豆球蛋白A（concanavalin A，Con A）、台氏液、红细胞裂解液购于北京欣经科生物有限公司。……