黄褐毛忍冬化学成分及先导物的糖基化研究＊

2012-01-23毛午佳贾宪生董登祥

中国药业 2012年22期

毛午佳，贾宪生，董登祥，刘彬

(贵阳职业技术学院，贵州贵阳 550081)

忍冬属植物黄褐毛忍冬Lonicera fulvotoinentosyHsu et S．C．Cheng收载于2011年版《中国药典(一部)》，具有清热解毒、疏散风热的功效，用于臃肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病[1]。黄褐毛忍冬含有多种皂苷类成分[2－4]，皂苷类具有保肝、降血脂、抗炎等生理活性，α－常春藤皂苷是保肝作用的主要成分[5－7]，并以常春藤皂苷为苷元形成多种皂苷。随着糖化学的发展，天然产物的糖基化修饰已成为研发新糖药物的有效途径之一。笔者从黄褐毛忍冬中提取了皂苷元，制备了乙酰化物和羧基甲基化物，鉴定了从石油醚提取物分离得到的三十烷醇和岩白菜素，其中岩白菜素是首次从该植物中得到。

1 仪器与试药

1730型傅里叶变换光谱仪;DX－300型质谱仪，INOVA－400型超导核磁共振波谱仪。黄褐毛忍冬于2010年5月购于贵阳，经鉴定为忍冬属植物黄褐毛忍冬Lonicera fulvotoinentosyHsu et S．C．Cheng;三十烷醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号为1509－200001);岩白菜素(中国药品生物制品检定所，批号为742－200111);薄层色谱硅胶G和柱层析硅胶H(青岛海洋化工厂);乙醇为化学纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 提取与分离

黄褐毛忍冬干燥花蕾粉碎后取1 kg，用75%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收乙醇，残留物挥尽乙醇后加水稀释，分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到石油醚提取物20 g，乙酸乙酯提取物42 g，正丁醇提取物96．3 g。石油醚提取物经硅胶柱层析，以石油醚、乙酸乙酯梯度洗脱，得到2个部分，第一部分经乙酸乙酯重结晶后得到化合物Ⅰ，第二部分经甲醇重结晶得化合物Ⅱ。取正丁醇提取物20 g，加适量甲醇溶解，加入丙酮，产生大量沉淀，过滤，得总皂苷6．4 g。

2．2 总皂苷的水解

取总皂苷加5%HCl水溶液，水浴中反应4 h，冷却，过滤，沉淀用水洗至中性，所得皂苷元经硅胶H行柱层析，以氯仿－甲醇(9∶1)洗脱，回收溶剂，残留物用甲醇结晶，得白色短柱状结晶，为化合物Ⅲ。

2．3 鉴定

化合物Ⅰ:化合物Ⅰ为白色蜡状物，易溶于氯仿，不溶于水。与三十烷醇标准品的薄层色谱Rf值相同(两种展开剂)，斑点颜色相同。与三十烷醇标准品的IR重叠光谱图一致，故化合物Ⅰ鉴定为三十烷醇。

化合物Ⅱ:化合物Ⅱ为白色结晶，高分辨质谱给出分子式为C14H16O9，EI－ MSm/z(%):328(M+，18．28);208(100);180(28．39);152(23．04)。IRvmax(cm－1):3 400 ～ 3 200(OH)，1 700，1 340，1 180(羰基)，1 620，1 540，860(芳环)，1 235，1 130(Ar－O－R)，1 090，960，910。化合物Ⅱ与岩白菜素对照品的薄层色谱，Rf值相同(两种展开剂)，且斑点颜色相同，与岩白菜素的IR重叠光谱图一致，故化合物Ⅱ鉴定为岩白菜素。

化合物Ⅲ:化合物Ⅲ为白色结晶，高分辨质谱给出分子式为C30H48O4，Liebermann－Burchard 反应呈阳性。IRvmax(cm－1):3 451(－ OH)，2 942(－ CH)，1 698(－ COOH)，1 464，1 387，1 303，1 268。1HNMR(C5D5N):δ5．46(1 H，m，H －12);4．20(1 H，m，H －3);4．16，3．70(1 H，d，J=11 Hz，H2 －23);3．28(1 H，m，H － 18);1．25，1．05，1．00，0．98 和 0．94(分别为 3 H，6 H，3 H，3 H，3 H，s，6×CH3)。显示分子中AB环上有2个羟基，DE环上有C－17位羧基。13CNMR(C5D5N):δ38．98(C －1)，27．85(C －2)，73．63(C －3)，43．05(C －4)，48．89(C －5)，18．86(C －6)，33．20(C －7)，39．95(C －8)， 48．34(C －9)， 37．46(C －10)， 24．02(C －11)，122．57(C －12)，144．76(C －13)，42．20(C －14)，28．58(C －15)，24．02(C －16)，46．82(C －17)，42．20(C －18)，46．64(C －19)，31．20(C －20)，34．48(C －21)，33．20(C －22)，68．16(C －23)，13．39(C －24)，16．24(C －25)，17．76(C －26)，26．40(C －27)，180．02(C －28)，33．45(C － 29)，24．02(C － 30)。以上数据与文献[8]中常春藤皂苷元的数据一致，故化合物Ⅲ鉴定为常春藤皂苷元。

2．4 常春藤皂苷元衍生物的制备与鉴定

二乙酰化物:取常春藤皂苷元0．5 g，加入醋酐20 mL，吡啶10 mL，于室温放置12 h，不时振摇，倾入冰水中，产生无色块状物，过滤，水洗，甲醇结晶，得白色针状晶体。IRvmax(cm－1:2 940(－CH)，1 730，1 240(乙酰基)。1HNMR(CDCl3):δ5．26(1 H，br，H －12);4．76(1 H，dd，J=6 Hz，8 Hz，H － 3);3．88，3．68(1 H，d，J=12 Hz，H2 －23);2．80(1 H，m，H －18);2．08，2．02(3 H，s，2 × －OAc);1．12，0．99，0．93，0．84 和 0．73(分别为 3 H，3 H，6 H，3 H，3 H，s，6 × CH3)。

羧基甲基化衍生物:称取150 mg(0．33 mmol)常春藤皂苷元，置于100 mL圆底烧瓶中，加入0．61 mL(9．9 mol)碘甲烷173 mg(0．66 mol)，氟化四丁基铵23 mL，5%碳酸氢钠和30 mL二氯甲烷，氮气保护，常温搅拌24 h，薄层色谱监测反应[展开剂为环己烷－乙酸乙酯(1 ∶1．5)，Rf=0．5]。停止反应，用二氯甲烷萃取反应液，收集有机相并用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得粗产物。经硅胶柱层析纯化粗产物，洗脱剂为环己烷－乙酸乙酯(1∶1)，获得产物 138．1 mg。1HNMR(CDCl3):δ5．28(1 H，s，H －12);3．73，3．44(1 H，d，J=10．4 Hz，H2 －23);3．62(3 H，s，H －28);1．12，0．95，0．92，0．89 和 0．72(分别为 3 H，3 H，3 H，6 H，3 H，s，6×CH3)。

羧基甲基化产物的酰化物:称取138 mg(0．29 mmol)常春藤皂苷元的甲基化产物，置于100 mL圆底烧瓶中，加入2 mL(24．81 mol)吡啶和1 mL(10．61 mol)乙酸酐，氮气保护下常温搅拌24 h，薄层色谱监测反应，反应停止后加入15 mL 1 mol/L HCl，用二氯甲烷萃取反应液，收集有机相并用无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得粗产物。用硅胶柱层析纯化粗产物，洗脱剂为环己烷－乙酸乙酯(7 ∶1)，获得产物 185．2 mg。1HNMR(CDCl3):δ5．31(1 H，br，H －12);4．78(1 H，m，H －3);3．88，3．69(1 H，d，J=11．4 Hz，H2 － 23);3．63(3 H，s，H － 28);2．07，2．02(分别为2 H，s，2 × OAc);1．16，0．96，0．93，0．90，0．83 和 0．72(分别为3 H，3 H，3 H，3 H，3 H，s，6 × CH3)。