吴德佩杨军

针刺对干眼症患者泪液黏蛋白5AC表达的影响

吴德佩1杨军2

目的观察针刺治疗干眼症的疗效及对泪液黏蛋白（Mucin,MUC）5AC表达的影响。方法50例（100只眼）干眼症患者采用针刺局部和远端相结合的方法，取穴睛明、攒竹、太阳、四白等，治疗前后观察患者干眼症状，并行泪液分泌试验（Schirmer I test，SIt）、泪膜破裂时间（tear break-up time,BUT）检查，免疫组化方法检测泪液黏蛋白5AC的表达量。结果泪液分泌量（mm/5 min）：治疗前5.2±2.6，治疗后7.3±2.1（t=2.71，P=0.03）。泪膜破裂时间（s）：治疗前3.7±1.4，治疗后6.9±3.8（t=2.59，P=0.04）。泪液黏蛋白5AC表达量（μg/ml）：治疗前0.77±0.13，治疗后0.99±0.11（t=1.98，P=0.05）。临床疗效：显效43只眼，有效46只眼，无效11只眼，总有效率为89%。结论针刺治疗可以促进泪液黏蛋白5AC的表达，提高泪膜稳定性，明显改善干眼症状。

针刺；干眼症；黏蛋白5AC

干眼症是由于泪液量或质的异常引起泪膜不稳定和眼表面损害，从而导致眼部不适症状的一类疾病。任何原因导致的眼表面泪膜异常均可引起干眼〔1-2〕。黏蛋白（mucin，MUC）是泪膜的重要组成部分，具有稳定泪膜、保护眼表等作用，黏蛋白的改变，包括量的减少和糖基化的改变，是干眼症发病机制中的重要环节〔3-4〕。已知针刺能促进泪液的分泌，有效提高泪膜的稳定性〔5〕，但是否对泪膜黏蛋白表达产生影响还未见报道。近年来，笔者采用针刺治疗干眼症取得较好疗效，我们在观察针刺对泪液分泌、泪膜破裂时间影响的同时，还对治疗前后泪液黏蛋白表达的变化进行了研究，现将结果报告如下。

1 临床资料

1.1 诊断标准

参照《中医病证诊断疗效标准》（中华人民共和国中医药行业标准，病证诊断疗效标准ZY/T001.1-94）相关标准拟定。（1）症状：眼干涩、异物感，视物疲劳，可伴有口鼻干燥等；②泪液分泌量测定（Schirmer I test）＜10 mm/5 min；③泪膜破裂时间（tear break-up time，BUT）＜10 s。

1.2 纳入标准

（1）符合上述诊断标准者；（2）已签署知情同意书者。

1.3 排除标准

（1）结膜瘢痕化、泪腺开口部闭锁者。（2）合并有其他结膜、角膜和虹膜明显病变者。

1.4 一般资料

观察病例为2009年1月—2010年12月在我院五官科门诊就诊的干眼症患者，共50例（100只眼），男/女=1∶2，年龄（41.6±3.1）岁，病程12个月～8年。

1.5 治疗方法

取穴：头面部取睛明、攒竹、太阳、四白、百会；远端取曲池、外关、合谷、足三里、三阴交。操作：患者取仰卧位，局部皮肤常规消毒，睛明采用7 mm无菌毫针浅刺，以患者眼部有酸胀感为度，不行任何手法，其余穴位采用40 mm无菌毫针，平补平泻。留针20 min。针刺每天1次，10 d为1个疗程。

1.6 观察指标

治疗前后进行泪液分泌量（Schirmer I test，SIt）、泪膜破裂时间（tear break-up time，BUT）检查，并检测泪液中的黏蛋白（mucin，MUC）5AC的表达量。

1.7 泪液中MUC5AC表达量的检测

1.7.1 样本的采集：于结膜囊内滴入0.5%丁卡因滴眼液1滴，瞩被检者向鼻测注视，将7 mm×5 mm的长方形硝酸纤维素膜经高温消毒后，将其压向颞侧角膜缘后2 mm的球结膜上50 s，然后将硝酸纤维素膜取下于空气中干燥放入干燥试管中，-20℃保存备用。每个样本重复3次，取平均值。

1.7.2 MUC5AC表达量的测定（免疫组织化学染色）：（1）4℃多聚甲醛固定；（2）3%H2O2室温孵育10 min，以消除内源性过氧化物酶活性；（3）磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗5 min；（4）正常山羊血清37℃封闭45 min；（5）滴加一抗工作液4℃过夜，PBS冲洗3次，每次5 min；（6）滴加二抗工作液，37℃孵育25 min。PBS冲洗5 min；（7）滴加辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）标记的链霉卵白素，37℃孵育20 min；（8）PBS冲洗3次，每次5 min；（9）DAB显色，蒸馏水冲洗，终止显色；（10）显微照相系统观察。表达强度用MPIAS-1000高清晰度彩色图像分析系统测定五个视野的光密度，取其平均值，以±s表示。阴性对照用PBS替代一抗，其余步骤同上。

1.8 疗效评定

治疗1个疗程（10 d）后进行疗效评定，评定标准参照国家中医药管理局颁布的《中医病证诊断疗效标准》，以临床症状、泪液分泌量、泪膜破裂时间为主要观察指标。（1）显效：症状消失，SIt＞10mm/5min，BUT＞10 s。（2）有效：症状减轻，SIt值有所增加，BUT较前延长。无效：症状无改善，SIt值未增加，BUT无变化。

1.9 统计学处理

采用SPSS12.0进行统计学分析，计量资料以x±s表示，采用独立样本t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床疗效

显效43只眼，有效46只眼，无效11只眼，总有效率为89%。

2.2 治疗前后各项指标比较

泪液分泌量（mm/5 min）：治疗前5.2±2.6，治疗后7.3±2.1（t=2.71，P=0.03）。泪膜破裂时间（s）：治疗前3.7±1.4，治疗后6.9±3.8（t=2.59，P=0.04）。泪液黏蛋白5AC表达量（μg/ml）：治疗前0.77±0.13，治疗后0.99±0.11（t=1.98，P=0.05）。

3 讨论

目前西医对干眼症的治疗主要是应用人工泪液或保存患者本身的泪液，这些措施的长期效果均不好〔6〕。本研究中，我们以泪液分泌量、泪膜破裂时间以及泪液的黏蛋白5AC含量为指标，以中医理论为指导，对针刺治疗干眼症的效果进行了观察。

干眼症属于中医“神水将枯”，或“燥证”的范畴，其病机是由于邪热留恋，肺阴不足，脾胃湿热以及肝肾亏损、阴血不足引起邪热阻络、血气不通，或者湿邪阻遏、清气不升，或者阴血不足，最终导致阴虚津亏、目失濡养。患者主要表现为眼内干涩不舒、瞬目频频〔7〕。笔者根据干眼症阴虚内热的病理特点，按照局部取穴的原则，筛选出针刺治疗干眼症的常用穴位：睛明、攒竹、太阳、四白、百会。睛明、攒竹同为膀胱经之穴，取之以调养眼部气血，滋阴清热；且睛明为五脉之会，为治疗眼病的要穴；太阳为眼周穴位，主治目疾。临床观察结果表明，针刺能够促进泪液分泌、延长泪膜破裂时间，大部分患眼干涩症状得以缓解，总有效率为89%（有研究者报告针刺治疗干眼症的有效率为85%〔8-9〕）。

本研究中我们特别观察了干眼患者治疗前后泪液黏蛋白5AC的变化。黏蛋白是泪膜的主体，由结膜杯状细胞分泌，在维持眼表稳定方面有重要作用，如稳定泪膜，在瞬目期间润滑角膜与结膜上皮，阻止水分蒸发防止干燥等〔9-10〕。治疗前，所有干眼患者的泪液样本中均检测到黏蛋白5AC的表达，经过针刺治疗1个疗程后，黏蛋白含量较治疗前明显增加，患眼的干涩症状也随之减轻。这说明针刺可以增加泪液中黏蛋白的表达，进而增强泪膜的稳定性减轻干涩症状。目前类似的报道尚未见到，该结果为针刺有效治疗干眼症提供了新的理论支持。其作用机制我们推测可能包括以下3个方面：（1）直接刺激结膜杯状细胞以及角膜和结膜上皮细胞分泌黏蛋白；（2）通过刺激支配分泌黏蛋白的角膜和结膜上皮的神经，间接增加黏蛋白含量；（3）通过刺激水性泪液分泌，减少黏蛋白降解。

总之，本研究表明，针刺治疗可以增加干眼症患者的泪液分泌，延长泪膜破裂时间，提高泪液中黏蛋白的表达，促进泪膜稳定，对治疗干眼症具有较好疗效。但针刺对黏蛋白表达调控的具体机制还需要进一步研究。

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Effect of acupuncture on expression of tear mucins5AC of dry eyes

WU Depei，YANG Jun.Ophthalmology Department，The People's Hospital of Guangnan County，Guangnan 663300，Yunnan Province，China

OBJECTIVETo observe the efficacyof acupuncture treatment on tears mucin5AC expression in patients with dry eyes.METHODSFifty patients（100 eyes）with dry eyes received acupuncture treatment on Jingming（BL1），Cuanzhu（BL2），Taiyang（EX-HN 5）and Quchi（LI 11）.Before and after treatment，tear secretion volume（Schirmer I test），break up time（BUT）were observed.The expression of MUC5AC was detected by immunity histological chemistry.RESULTSThe total effective rate was 89%（89/100）with acupuncture treatment.There was a significant difference in statistics in tear secretion volume（mm/5 min）5.2±2.6 and 7.3±2.1（t=2.71，P=0.03），BUT（s）3.7±1.4 and 6.9±3.8（t=2.59，P=0.04）and MUC（μg/ml）0.77±0.13 and 0.99±0.11（t=1.98，P=0.05）in tears before and after treatment.CONCLUSIONSAcupuncture apparently relieved the symptoms of dry eyes.Up regulation of the expression of tear Mucins5AC may be one of the underlying mechanisms.

acupuncture；dry eye syndrome；mucin5AC

R777.34；R245.3

B

1002-4379（2012）04-0267-03

1云南省广南县人民医院五官科，广南县663300

2云南省第一人民医院眼科，昆明市

杨军，E-mail：lai_doc@163.com