郑慕阳 陈海斌 梁业斌

糖尿病(diabetes mellitus，DM)实验室分型诊断主要依靠胰岛素及C-肽(C-P)释放试验，1型DM表现为胰岛B细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏，2型DM则表现为胰岛素抵抗为主伴胰岛素分泌不足，或胰岛素分泌不足为主伴或不伴有胰岛素抵抗[1]。在日常工作中经常会遇到不同程度的溶血标本[2]，鉴于临床对DM患者诊断、治疗、监测及预后判断的需要，准确了解标本溶血对胰岛素及C-肽测定的干扰尤为必要。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

采用德国Roche公司的E601全自动电化学发光免疫分析仪及配套的胰岛素及C-肽检测试剂盒。

1.2 不同程度溶血标本的制备

为了使胰岛素和C-肽达到一定的测定浓度，抽取体检者餐后1 h静脉血液，一针两管，分别注入带分离胶的促凝试管。其中一管经37 ℃水浴30 min后以4000 r/min、离心半径为17.5 cm进行离心10 min，作为非溶血标本；另一管放置-20 ℃冰箱保存2 h后取出融化，以4000 r/min、离心半径17.5 cm进行离心10 min，分离溶血血清。用SYSMEX XT-1800i全自动血液分析仪测量血红蛋白(Hb)质量浓度，然后将溶血血清与非溶血血清按不同比例混合，得到血红蛋白(Hb)质量浓度为10 g/L、5 g/L、2.5 g/L、1.2 g/L 5、0.625 g/L的溶血标本。

1.3 测量方法

室温(20 ℃)环境下分为4个时间段(0、30 min、60 min、120 min)，分别测定溶血和非溶血标本的胰岛素及C-肽浓度。

1.4 溶血或时间因素对测定干扰的评价方法

按下式评价溶血或时间因素对测定结果的影响：

式中：|F|：溶血或时间因素引起的误差；X：溶血标本或放置一定时间后待测物浓度；X0非溶血血清待测物浓度。若|F|＞0.10，表示溶血干扰客观存在，如|F|＜0.10，表示溶血干扰轻微，可以忽略不计[3]。

2 结果

标本溶血可使胰岛素浓度降低，溶血程度越大、标本放置时间越长，胰岛素浓度下降越明显，胰岛素浓度测定与标本溶血程度及放置时间呈负相关；标本溶血对电化学发光免疫法测定血C-肽无干扰。结果见表1、表2。

表1 不同时间段不同程度溶血标本的胰岛素浓度(uIU/ml)

表2 不同时间段不同程度溶血标本的C-肽浓度(pmol/ml)

3 讨论

胰岛素由胰岛B细胞合成和分泌，其分子量约为6000，由α、β2条肽链构成的一种多肽，是人体内惟一降低血糖的激素。它能增加细胞膜对葡萄糖、氨基酸及钾离子通透性，促进葡萄糖的利用。胰岛素分泌主要受血中葡萄糖浓度的调节，当血中葡萄糖浓度升高，可刺激胰岛素的分泌。C-肽由31个氨基酸残基组成，胰岛素在胰岛B细胞形成之前，先在细胞内合成胰岛素原，并进而分解成等分子的C-肽和胰岛素[4]。理论上血清中的C-肽和胰岛素成一定比例关系，但C-肽不被肝脏破坏，在外周血中其分子浓度比胰岛素高约5倍，半衰期约为胰岛素的2倍多，并且药用胰岛素中不含C-肽，外源性抗体均不影响C-肽的测定。因此，对于接受胰岛素治疗的患者测定C-肽更能精确地判断胰岛B细胞的合成与释放胰岛素的功能水平[5]。

目前，测定胰岛素和C-肽的主要方法有放射免疫分析(RIA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、酶免疫分析(EIA)、化学发光免疫分析(CLIA)以及电化学发光免疫分析法(ECLIA)。由于RIA法报告时间长、结果不稳定并且存在同位素污染的问题，已趋于淘汰；酶免疫分析法虽然克服了放射免疫分析中放射性污染的弊端，具有设备简单，操作安全等优点，但这种依靠比色法或偏振光法的检测技术存在酶不稳定、光度测量范围窄、灵敏度不高、难以定量、易造成漏诊和假阳性等不足，受到了应用上的限制；时间分辨荧光免疫分析、化学发光免疫分析及电化学发光免疫分析法具有灵敏度高、特异性强、所用试剂具有良好的稳定性、检测范围较宽、仪器能实现自动化、不污染环境以及能消除常规荧光测定中的高背景等优点，是非放射免疫分析中很有发展潜力的分析方法。但有研究表明，不同的分析方法对溶血的抗干扰能力不同，采用竞争分析法的放射免疫分析较采用双抗体夹心法的电化学发光免疫分析法在测定胰岛素时对溶血的抗干扰能力更强[6-7]。

通常正常人及2型DM患者的胰岛素及C-肽释放曲线如图1、图2所示。即正常人血清胰岛素和C-肽均是空腹最低，餐后1 h最高，2 h次之，3 h接近空腹水平，而DM患者则表现为逐步上升的趋势，即：空腹低，1 h较高，2 h最高，3 h次高甚至最高[4]。魏子坤等[8]研究表明，在可疑人群中即使其糖耐量完全正常，但胰岛素和C-肽分泌异常者，如果不进行胰岛素和C-肽释放试验将会降低诊断的准确性，加大漏诊率。

图1 INS释放曲线

图2 C-肽释放曲线

4 结语

由于红细胞中含有胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme，IDE)是一种过氧化物水解酶，能够高效、特异地降解胰岛素，被认为是在细胞水平降解胰岛素最主要的酶，随着红细胞的破坏，其内存的IDE释放进入血清，能导致溶血标本胰岛素浓度降低。本实验显示，标本溶血对电化学发光免疫分析法测定C-肽无干扰；溶血标本的胰岛素测定结果与溶血程度及放置时间呈负相关[9-10]。在测定胰岛素释放试验时，任何时间段的标本溶血均可对释放曲线的高低和走向产生影响，例如空腹阶段标本溶血造成的胰岛素降低可能会被误诊成1型DM，正常人1 h阶段标本溶血造成的胰岛素降低有可能误诊成2型DM等等，从而给临床医师的诊断和治疗带来困惑。因此，检验师做胰岛素测定时要绝对避免溶血，在临床中遇到不可避免的溶血标本时应在报告单上注明。临床医师面对胰岛素释放曲线和C-肽释放曲线不相符情况下有必要与实验室沟通以排除标本因素的干扰。子能出版社,1991:190.

[6]沈云峰,胡远贵.溶血对电化学发光免疫分析法测定胰岛素的干扰[J].检验医学,2007,22(3):359-360.

[7]Cheyenne D,LetaiUerur A,Trivin F,et a1.Effect of hemolysis on the concentration of insulin in serum determined by RIA and IRMA[J].Clin Chem,1998,44(2):354-356.

[8]魏子坤,杨小丽,田竹芳.OGTT、IRT和CPRT联检在DM2诊治中的价值[J].放射免疫学杂志,2006,19(1):11-13.

[9]Sapin R,Ongagna JC,Gasser F,et a1.Insulin measurements in haemolysed serum:influence of insulinase inhibltors[J].Clin Chim Acta,1998,274(1):111-117.

[10]Sapin R.Interference of hemolysis and hemoglobin：example of insulin assay[J].Ann Biol Clin,2001,59(1):113-114.