李 冉， 刘 江， 崔建忠， 王凯杰， 徐爱军， 王海涛， 高俊玲

蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)可导致颅内发生一系列并发症，是患者病残和死亡的主要原因［1］。研究证实SAH后血管壁内皮细胞凋亡现象在SAH病理进程中起关键作用［2］，最终可导致脑损伤后期的神经功能缺陷［3］。细胞凋亡多通过半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cysteine asparti cacid-specific protease，caspase)介导的信号途径完成，细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase，ERK)级联途径是SAH后重要的信号转导通路，已有研究证实脑缺血性损伤中ERK在炎性反应等方面发挥了重要作用［4］，应用ERK抑制剂U0126预处理可减少脑创伤模型60%的脑部损伤面积［5］。类似机制是否存在于SAH模型小鼠神经元凋亡过程仍不清楚。近年的研究多集中于SAH后迟发性脑血管痉挛(cerebral vasospasm，CVS)及并发症的防治，对SAH早期脑损伤分子机制研究甚少。本研究对ERK、caspase-8在小鼠SAH损伤中的作用进行研究，旨在探讨ERK通路在SAH早期脑损伤中的分子机制。

1 材料和方法

1．1 材料 β-actin鼠单克隆抗体(Sigma)，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔/兔抗小鼠IgG(Sigma)，预染蛋白 Marker(灏洋生物)，phosphorated-ERK多克隆抗体(Cell signaling)，TUNEL试剂盒(Roche)，U0126(Promega)，caspase-8 兔抗鼠多克隆抗体(Santa cruz biotechnology，Inc)。健康雄性ICR小鼠由北京维通利华动物中心［SCXK(京)2002-2003］90只，体质量28～32g，随机分为假手术对照组(Sham组)18只;模型组(SAH组)36只;U0126干预组(SAH+U0126组)36只，各组分为SAH 12、24、48h 3 个亚组。

1．2 方法

1．2．1 动物模型的制备 参照文献［6］的方法并略作改良，麻醉消毒后，于手术显微镜下自小鼠右侧颈外动脉(ECA)经颈内动脉(ICA)导入5-0单纤维尼龙线，至大脑前动脉(ACA)与大脑中动脉(MCA)分叉处，刺破动脉壁，总进入长度约为(10±0．5)mm。假手术对照组将尼龙线仅送至ACA与MCA分叉处，稍感阻力即停止继续插入，并迅速退出尼龙线。……