闵鹤鸣， 鲁璐清， 王文娟， 武晓宁， 闵连秋

缺血/再灌注(ischemia/reperfusion)损伤是一种重要的由于供血障碍引起的应激性疾病［1］，血供中断后一定时间内恢复，可引起缺血组织发生较血供恢复前更严重的损伤。有研究证明脑缺血/再灌注后存在内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)，且与神经元凋亡有关［2，3］。caspase 家族是细胞凋亡过程中最重要的蛋白酶，其中caspase-9为凋亡启动酶，caspase-3为凋亡效应酶。2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose，2-DG)是一种内质网的保护性蛋白GRP78的诱导剂，可以诱导ERS的发生。本研究从ERS的角度探讨脑缺血预处理在缺血/再灌注大鼠脑损伤中的保护作用及其机制。

1 材料与方法

1．1 动物与分组 健康雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠48只，体重280～320g，由辽宁医学院实验动物中心提供，许可证号:SCXK(辽)2003-0007。随机分为脑缺血预处理组:缺血预处理30min，再灌注3d，再次缺血2h，再灌注24h处死大鼠;2-DG预处理组:2-DG溶于双蒸水，工作浓度为50mg/ml，按照100mg·kg-1·d-1的剂量给予大鼠腹腔注射，每天一次，连续7d后进行假手术处理，再灌注3d，缺血2h，再灌注24h处死大鼠;脑缺血/再灌注组:假手术处理，再灌注3d，缺血2h，再灌注24h处死大鼠;对照组:第一次假手术后再灌注3d，第2次假手术后再灌注24h处死大鼠。每组12只。

模型制备:参照 Longa［4］和 Nagasawa［5］报道的方法加以改进制备大鼠大脑中动脉(MCA)局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠用10%水合氯醛350mg·kg-1腹腔注射麻醉，颈部正中切口，分离并结扎左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)和ICA的颅外分支-翼腭动脉。将ICA远心端用动脉夹夹闭，距CCA分叉处近心端0．5cm处将CCA剪一小口，插入碳素鱼线，松开动脉夹，向ICA插入鱼线(20±2)mm，直至稍感阻力，栓线进入ICA后，穿过MCA起始端至大脑前动脉近端，阻断MCA的所有血流来源，扎紧备线，外留10mm线头。……