钱源 肖雪 郭知 张兰 胡大军 马润玫

（昆明医科大学 妇产科细胞遗传实验室，云南 昆明 650032）

目前较为普遍的染色体疾病检测方法是细胞遗传学染色体核型分析，该技术需要对处于分裂中期的细胞进行，准确性高，但需细胞培养后进行染色体制备。FISH技术是近分子细胞遗传学生物学方法中的一种，它的检测无需细胞培养，对于13、18、21、X，Y染色体数目异常的检测最快可在48小时内完成，并且准确率高［1－3］。

需要进行羊膜腔穿刺的妊娠妇女一般都为产前筛查为高风险或者B超提示胎儿异常等指征，如等待染色体结果的时间较长，则会给孕妇的情绪带来较大的影响。FISH检测能在较短的时间内获得结果，本研究拟回顾本实验室自开展FISH以来的检测结果，并与培养的羊水细胞染色体核型结果相比较，研究孕妇年龄、产孕次与胎儿异常类型的相关性，以及母血污染对结果的判读的影响。

1 材料与方法

1．1 研究对象 选择本院自2011年1月至2012年5月期间进行羊膜腔穿刺的妊娠妇女共248名，其中5人为双胎样本，其中4例为单绒毛膜性，1例为双绒毛膜性，故分别抽取A和B胎的羊水，所以羊水总例数为249。所有羊水均培养成功进行核型分析。孕妇年龄21～43岁，孕周为18～24周。

1．2 研究方法

1．2．1 羊水采集 在B超引导下，用21G PTC穿刺针经腹壁抽取羊水25ml，置于无菌注射器中。留取5ml用于FISH检测，其余用于细胞培养。

1．2．2 羊水细胞FISH 检测 步骤包括制片、杂交、洗脱和镜检部分。详细操作参考金菩嘉公司操作手册，并结合本实验室的条件。共使用5种染色体探 针，分 为 2 组，即 13／21 组 和 18／X／Y 组。13／21组的探针分别标记位于13q14（绿色）和21q22（红色）处。18／X／Y探针组为CSP探针，探针分别定位于18，X，Y 的p11．1－q11．1区域，分别标记水蓝色、绿色和红色。

1．2．3 结果判读 选择50个形态规整的间期核阅读杂交信号。正常信号方式细胞的比例达到90%以上即可定为正常。某种异常信号方式细胞的百分比达到60%以上，则可为异常。如结果判断为嵌合体类型则选择100个形态规整的间期核阅读杂交信号。

2 结 果

249例羊水染色体检测中，染色体正常数目的有243例（其中111例XY，132例XX）。共检出染色体数目异常6例，异常率为2．4%。异常类型包括21三体，13三体，18三体，XO和嵌合型XO，以及XXX（见表1）。21三体有2例，占全部异常的33．3%。所有FISH结果均与培养后羊水细胞核型分析结果相吻合，嵌合体的比例也与之相吻合。有1例双绒毛膜性双胎结果中A胎为18三体，B胎正常。

表1 249例羊水细胞FISH检测结果以及产前诊断指征（共6例异常）

如果按照母亲年龄是否大于35岁为界，将样本分为2组，≥35岁组和＜35岁组。总共6例异常样本中的5例分布于＜35岁组中。仅1例为＞35岁组，具体核型详细见表2。

表2 按年龄分组的异常检测结果

按照母亲怀孕次数分为3组，怀孕次数1次、2次和3次组中分别有3例，1例和2例染色体数目异常胎儿，详细见表3。按照生产次数分为2组，生产0次与生产1次组中各有3例异常类型（表4）。

表3 按孕次分组的异常检测结果

表4 按产次分组的异常检测结果

3 讨 论

产前诊断为侵入性宫内诊断，通过各种检测或者技术手段，对胎儿的先天性或者遗传性疾病做出诊断。传统方法为羊水细胞培养后的G带显色检测。该方法的局限性为检测周期长（通常为21天），可能面临细胞培养失败的问题。

FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。FISH具有的最明显优点为检测速度快，不需细胞培养，所需羊水量小，与核型吻合率也较高［3－6］。

本研究FISH诊断的结果与核型分析相一致。249例样本中共检出染色体数目异常6例，21三体在异常类型中所占的比例最高。可见，唐氏综合征的筛查和诊断是非常重要和必要的。

在本研究所有穿刺指征类别中，B超提示胎儿异常组中检出的异常比例较其他类别高，这提示B超对于胎儿染色体发生异常的提示作用是不容忽视的。本研究中惟一的1例13三体发生于1个双绒毛膜性的双胎之一A胎，B胎正常，该孕妇仅进行了B超检测结果显示有一胎异常，其并未进行唐筛等相关检查。另一名胎儿诊断为XO的孕妇B超提示15周胎儿胸腔积液，同时也未进行其他相关筛查检测。

所有6例数目异常样本中有5例母亲年龄小于35岁。一直以来，母亲年龄在评估胎儿染色体风险高低中占有重要地位，高龄孕妇被认为是必要进行产前诊断的主体。但从本研究的异常分布情况来看，更需要关注母亲年龄小于35岁孕妇的胎儿情况。

已有报道支持上一次胎儿染色体异常的孕妇生育下一次异常胎儿的风险有所增加。由于本研究异常例数不多，我们并未对不同孕次和产次中异常胎儿染色体分布差异进行比较。期望以后收集更多的数据以扩大研究。

本研究中成功对1例XO（65%）／XX（35%）嵌合体进行了诊断，并且嵌合比例与核型分析保持一致。异常XO比例大于60%，所以容易判断其为嵌合型。另外，我们还正确诊断1例血性羊水的标本为21三体。在笔者收集的249例羊水中大约有20%样本离心后明显或者微量的血污染，按照操作手册要求FISH实验室接受的羊水须为无外观母血污染的样本，但实际临床医生在羊膜腔穿刺过程中，由于胎盘的位置等原因导致有母血污染，并不能拒绝对这些样本进行检测。这都需要在诊断中根据样本的情况排除影响因素最终才能准确诊断。所以，在FISH诊断方面还有各个实验室具体的经验，最终的目的就是保证诊断的准确性。

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