恽 文， 季明华， 李文静， 李 建， 钟山亮， 唐金海，赵建华

微小RNA(miRNA)是一类新近发现的存在于真核细胞中的非编码小分子RNA，通过下调蛋白编码基因的表达而对不同细胞的生长、分化或发育过程起关键调控作用。分析细胞或组织样本中miRNAs的表达可为研究这类分子的生物学功能提供重要的信息。成熟miRNAs片段小，没有poly(A)尾巴，家族成员间通常只有一两个碱基的差别，并且在细胞中的表达水平普遍较低，这些特性给miRNA定量检测方法的建立带来了困难和挑战。为此，本文统一采用SYBR Green I的荧光模式，在Li等［1］报道的基础上建立一种新的基于连接酶依赖性反应的miRNA实时定量PCR方法(LDR-qPCR法)，并与茎环逆转录的SYBR GREEN实时定量PCR法［2］(茎环RT-qPCR法)进行比较，希望能为miRNA的研究提供敏感而准确的检测工具。目前miR-122的研究主要集中在肝脏疾病上，已被认为是一个调节肝脏代谢和发育的“肝特异性miRNA”。不过，最近Sun等［3］通过芯片筛选和RT-qPCR法确认，证实 miR-122a在乳腺癌干细胞中的表达水平较乳腺癌MCF-7细胞明显增高;靶基因预测分析显示其潜在靶点涉及肿瘤发生、DNA修复、细胞周期调控和信号转导等多个过程，提示miR-122a很可能是乳腺癌细胞、特别是癌干细胞的重要调控因子。已知乳腺癌是激素依赖性肿瘤，对雌激素的依赖性最大;其发生发展与内分泌功能失调密切相关，该过程有多种miRNAs参与，如 Wickramasinghe等［4］发现在乳腺癌MCF-7细胞中，雌二醇可抑制miR-21的表达，这种抑制作用可被内分泌治疗药物如他莫昔芬和氟维斯群等阻断。乳腺癌细胞miR-122a的表达是否也与雌激素调控有关，本文亦对此进行初步研究。……