徐岳军 庄晓玲 方汉波

(舟山医院,浙江 舟山 316000)

血细胞分析仪以其快速、准确等优点在血液分析检测中占据了主导地位,但在临床应用中存在着诸多干扰因素,如何做好血细胞分析的质量控制是实验室不断探索的课题之一。为了能够及时发现和正确排除冷凝集对血细胞分析仪检测结果的干扰,作者对工作中发现的冷凝集标本进行了一些试验,结果报告如下。

1 标本与方法

1.1 标本来源 从2010年12月～2011年2月本院住院患者静脉血血常规检验结果中挑选出MCHC数值＞360 g/L的标本[1],排除脂血、黄疸、溶血后,共筛选出有红细胞冷凝集的标本38例。其中男22例,女16例.年龄 22～90岁,平均(56±17)岁,包括肝癌、急性早幼粒细胞白血病各3例,肺癌、食道癌、肺炎、胰腺炎、脑外伤各2例,淋巴瘤、伴成熟的急性粒细胞白血病、急性粒单细胞白血病、骨髓增生异常综合征、巨球蛋白血症、结肠癌术后、败血症、急性会厌炎、伊文氏综合征、血管炎、消化道穿孔、上消化道出血、胸腔积液、胆囊炎、骨折、肝硬变、腹痛、肺气肿、肺结核、慢性肾小球肾炎、右腕切割伤、尿潴留各1例。

1.2 标本检测 所有标本在18～22℃室温放置半小时后,按LH750全自动血细胞分析仪操作规程进行上机分析白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hgb)、血细胞比容(HCT)、平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞容积分布宽度(RDW)和血小板计数(PLT)。然后将所有标本置37℃水浴30分钟,再次按LH750全自动血细胞分析仪操作规程进行上机分析上述各项参数。本实验质量控制要求如下:所有仪器操作人员均经过专业统一培训,实验操作中人员相对固定;在仪器分析前每天以Coulter 5C(Beckman公司)全血质控物检测,监控各项参数在¯x±2s范围内;并受全国血液室间质评计划监控。

1.3 标本镜检 水浴前后均制作血涂片,干燥,Wright染色。

1.4 冷凝集试验 所有标本按张红进[2]报道作冷凝集试验。

2 结 果

2.1 38份标本冷凝素效价检测结果1:16为25例,占 65.8%(25/38);1:32为 8例,占 21.1%(8/38);1:64为3例,占7.9%(3/38);1:128为5例,占 13.2%(5/38);1:256和 1:1024各 1例,占2.6%(1/38)。

2.2 38例标本水浴前后的检测结果见表1。经配对 t检验,WBC、RBC、HCT、RDW水浴后较室温明显增高(均 P ＜0.01),而 Hgb 、MCV 、MCH、MCHC 明显降低(均P＜0.01),PLT无明显变化(P＞0.05)。

表1 38份标本水浴前后各参数检测结果±s)

表1 38份标本水浴前后各参数检测结果±s)

项 目 WBC(×109/L)RBC(×1012/L)Hgb(g/L)HCT(%)MCV(fl)MCH(pg)MCHC(g/L)RDW(%)PLT(×109/L)水浴前 5.95±3.68 2.41±0.67 97.12±25.74 0.24±0.07 101.28±7.23 41.64±11.68 408.25±91.52 14.40±2.46 153.84±99.62水浴后 6.34±3.76 2.88±0.80 95.74±25.90 0.28±0.08 97.09±6.30 33.36±2.21 343.58±5.84 14.65±2.47 155.26±97.92 t值 -3.117 -6.272 9.453 -5.757 6.125 4.826 4.491 -3.882 -0.728 P值 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.471

2.3 本组38例冷凝集标本中,以影响红细胞聚集为主,但同时有白细胞、血小板聚集各2例。2例白细胞明显减少者外周血涂片均可见中性粒细胞聚集,血细胞分析仪显示平均中性粒细胞体积均值(MNV)和中性粒细胞体积分布宽度(NDW)显著增高,WBC分别为 5.5×109/L、4.6×109/L,经37℃水浴后,WBC明显增高,分别为9.5×109/L、6.8×109/L。2例血小板减少者外周血涂片可见血小板聚集,白细胞直方图 35fl处有明显干扰峰,PLT分别为49×109/L、128×109/L。1例经 37℃水浴后血小板聚集加剧,采末稍血手工计数血小板为60×109/L。1例经37℃水浴后血小板计数增加,白细胞直方图干扰峰消失,血小板计数为196×109/L。

2.4 各参数水浴前后的差值与冷凝集素的对数相关分析。38份标本冷凝集素最低 1:16,最高1:1024,中位数 1:64。38份标本水浴前后的WBC、RBC、Hgb 、HCT 、MCV 、MCH 、MCHC 、RDW 、PLT 平 均差值分别为0.39×109/L、0.47×1012/L、-1.37g/L、0.04%、-4.19 fl、-8.29 pg、-64.70 g/L、0.24%、1.42×109/L。为观察冷凝集素对血细胞分析仪检测结果的影响,以各参数水浴前后的差值为观察指标,对冷凝集素效价的对数与各观察指标进行相关分析,发现凝集素效价的对数与WBC、RBC、HCT水浴前后的差值存在负相关(r值分别为-0.427、-0.838、-0.907,均 P ＜0.01),与 MCV、MCH 、MCHC水浴前后的差值存在正相关(r值分别为0.524、0.907、0.894,均 P ＜0.01),与 Hgb、RDW 、PLT 水浴前后的差值无相关性(r值分别为0.081、-0.086、0.147,均 P＞0.05)。

3 讨 论

血细胞分析仪技术以电阻抗法为主,光散射法为辅。RBC和PLT的检测是血细胞分析仪的重要组成部分,由于两者在体积上有明显的差异,故通常在同一个通道内测量,根据不同的阈值,计算机分别给出RBC和PLT数目。RBC计数通道上限为200和300飞升之间,只有体积相当的红细胞或小红细胞团块(两个或三个红细胞)进行了分析,而大红细胞团块完全被忽视,这将导致不合逻辑低红细胞计数和高MCV(每个小红细胞聚集是考虑作为一个单粒子)。冷凝集抗体可以为多克隆或单克隆自体抗体,冷凝集自身抗体主要是IgM,少部分是IgG和IgA。冷凝集自身抗体的抗原即为红细胞,30℃以下抗体可与多个红细胞结合后迅速形成血凝块(红细胞凝集),温度提高后(37℃)凝集消失。较高红细胞冷凝集素,能与患者自身红细胞在低温下产生凝集现象,干扰血细胞分析仪检测。本实验结果显示,红细胞冷凝集标本在水浴前在血细胞分析仪上检测结果较水浴后 RBC和HCT结果显著降低(均P ＜0.01),同时Hgb、MCV、MCH 和 MCHC 结果均显著增高(均P＜0.01)。与乐家新等[3]报道相比,除Hgb外,其余均相同。这种现象是由于冷凝集素使红细胞凝集,导致RBC数减低。尽管凝集的RBC体积大于单个RBC体积,在通过血细胞分析仪微孔计数时得到的MCV增大,但红细胞凝集时以RBC减低为主要特征。而Hgb的虚假增高,为红细胞上的冷凝集素所致[4]。为观察不同冷凝集素的效价对血细胞分析仪检测结果的影响,作者通过对各参数的水浴前后的差值与冷凝集素效价的对数相关分析,发现冷凝集素的对数与 WBC、RBC、HCT存在负相关,与MCV、MCH、MCHC存在正相关,说明冷凝集素的效价越高,引起红细胞的凝集更为明显,对血细胞分析仪的结果影响越大。

冷凝集可导致血细胞分析仪红细胞相关参数的改变,也可凝集淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞和血小板,使WBC、PLT的结果也假性减低[5-6]。本组资料中发现白细胞和血小板聚集各2例,其中血小板聚集病例由于聚集的血小板同时又对白细胞计数产生干扰,虽然LH750有白细胞计数纠正功能,但其结果并不确实。冷凝集素对血细胞计数的影响是明显的,必须引起高度重视,在日常工作中,严格按照程序操作,消除干扰,使检测的结果准确可靠。

[1] Petrucci J V,Duanne PA,Chapman C C.Spuriouserythrocyte indicesasmeasured by the model SCoulter counter due to cold agglutinins.Am JClin Pathol,1971,56:500

[2] 张红进.冷凝集试验影响因素分析.临床血液学杂志,2009,22(2):97

[3] 乐家新,马俊龙,徐菡,等.红细胞冷凝集对不同类型血细胞分析仪检测结果的影响探讨.医疗卫生装备,2009,30(2):69

[4] Godon A,Genevieve F,Marteau-Tessier A,et al.Automated hematology analysers and spurious counts Part 3.Haemoglobin,red blood cells,cell count and indices,reticulocytes.Annales debiologie clinique,2012,70(2):155

[5] Zandecki M,Genevieve F,Gerard J,et al.Spuriouscounts and spurious results on haematology analysers:a review.Part I:platelets.Int Jnl Lab Hem,2007,29:4

[6] Zandecki M,Genevieve F,Gerard J,et al.Spuriouscounts and spurious results on haematology analysers:a review.Part II:white blood cells,red blood cells,haemoglobin,red cell indices and reticulocytes.Int Jnl Lab Hem,2007,29:21