章宏琼，杨娟，周云，宋佳楠，朱忆思梦，施孟如，张洪勤

（温州医学院，浙江 温州 325035，1.仁济学院；2.生物学实验教学中心）

红树植物秋茄ISSR条件的优化

章宏琼1，杨娟1，周云1，宋佳楠1，朱忆思梦1，施孟如2，张洪勤2

（温州医学院，浙江 温州 325035，1.仁济学院；2.生物学实验教学中心）

目的：探讨红树植物秋茄简单序列重复区间扩增多态性分子标记（ISSR-PCR）分析的最优条件，以获得清晰、重复性好的简单序列重复区间扩增多态性（ISSR）扩增结果。方法：对ISSR-PCR多个条件中的单个条件包括DNA的提取、模板浓度、Taq酶的选择与用量、Mg2+和三磷酸脱氧核糖核苷酸（dNTP）浓度等进行了比较、优化。结果：从单条件中得出每个条件的最优条件，从而获得清晰、重复性高的电泳图谱。结论：秋茄ISSR-PCR分析最适宜的扩增条件为：25μL PCR反应体积中，0.75～1.0 U Taq DNA聚合酶，0.8μmol/L引物，0.2 mmol/L dNTP，2.0～2.5 mmol/L MgCl2，40 ng/μL模板DNA。

红树科；秋茄；简单序列重复区间；条件优化

红树林是处于亚热带、热带海洋与陆地过渡带的特殊生态系统，是海岸带的生态关键区，具有抵抗海啸和台风、调节区域气候、维护生物多样性等重要生态功能[1]。秋茄（Kandelia candel）是我国分布最广的常见红树植物，其天然分布最北至福建福鼎市，人工种植最北至宁波象山港，全世界最北分布的红树植物也是秋茄[2]。

简单序列重复区间扩增多态性（inter-simple sequence repeat，ISSR）DNA分析由Zietkiewicz等[3]于1994创建，是建立在PCR反应基础上的一种新的分子生物学技术，它把随机扩增多态性DNA分子标记（random amplified polymorphic DNA，RAPD）和微卫星标记（simple sequence repeat，SSR）的优点相结合，不但具有RAPD所需DNA量少、操作简单、不需预知研究对象的基因组序列等优点，而且具有SSR的稳定性[4]。……