潘伟，谷雪梅，沈飞霞

（温州医学院附属第一医院 内分泌科，浙江 温州 325000）

大鼠AQP7基因重组腺病毒载体的构建及其在3T3-L1脂肪细胞中的表达

潘伟，谷雪梅，沈飞霞

（温州医学院附属第一医院 内分泌科，浙江 温州 325000）

目的：构建携带大鼠AQP7基因的腺病毒载体，并检测其在3T3-L1脂肪细胞中的表达。方法：采用RT-PCR方法，从大鼠脂肪组织中扩增克隆大鼠AQP7基因，插入到穿梭质粒中获得重组质粒pDC316-AQP7。PCR、酶切鉴定后，重组穿梭质粒和骨架质粒经脂质体2000转染293细胞出毒产生重组腺病毒。经PCR进行鉴定，转染293细胞扩增并纯化，半数组织培养感染剂量（TCID 50）方法测定腺病毒滴度。体外转染分化成熟的3T3-L1细胞，用Western blot方法检测AQP7的表达水平。结果：PCR、酶切及测序证实重组穿梭质粒构建正确。同时成功构建AQP7重组腺病毒，并制备出高滴度的病毒保存液，可以有效转染3T3-L1细胞。结论：成功构建了含大鼠AQP7基因的重组腺病毒载体且其可以在3T3-L1细胞中有效表达，为今后更好地研究AQP7在肥胖发生发展过程中的调控机制奠定了基础。

水通道蛋白7；重组腺病毒；3T3-L1细胞；大鼠

水通道蛋白7（AQP7）为近年来发现的肥胖相关基因，其在脂肪组织中大量分布，参与甘油转运而影响脂肪代谢，与肥胖形成关系密切。多项研究[2-4]显示，AQP7功能下降或缺失致使脂肪细胞中甘油堆积，进而促进甘油三酯的合成，引起糖脂代谢紊乱，最终可能导致肥胖和（或）2型糖尿病的发生。AQP7对甘油的运输作用使人们对肥胖有了新的认识，从而对肥胖的研究进入一个崭新的领域。……