乔录新，张玉林，丁 渭，陈德喜

(首都医科大学附属北京佑安医院感染科，北京100069)

EGFP－线粒体蛋白导入载体的构建及功能验证

乔录新，张玉林，丁 渭，陈德喜*

(首都医科大学附属北京佑安医院感染科，北京100069)

目的 构建能够将外源蛋白导入真核细胞线粒体的真核表达载体，并且通过增强型绿色荧光蛋白的表达进行示踪。方法 利用多重PCR扩增法将线粒体导肽序列与EGFP序列融合在一起，并插入真核表达载体pcDNA3.1，构建成真核表达载体pcDNA5.1-EGFP。将P53基因分别插入pcDNA5.1-EGFP和pcDNA3.1构建成pcDNA5.1-P53和pcDNA3.1-P53载体。经酶切和测序验证后在脂质体介导下分别将上述载体转染293T细胞，一方面在荧光显微镜下比较绿色荧光蛋白与细胞色素C在细胞内的分布情况，另一方面通过免疫荧光法比较P53蛋白在细胞内的定位。结果 绿色荧光的表达分布与细胞色素C具有一致性，且转染pcDNA5.1-P53载体的细胞内P53蛋白集中在胞质线粒体中，而转染pcDNA3.1-P53载体的细胞内P53蛋白主要分布在细胞核内。结论 成功构建能够将外源蛋白导入线粒体的真核表达载体。

表达载体;绿色荧光蛋白;线粒体导肽

线粒体是真核细胞重要的细胞器，是人体的动力工厂，无论是细胞的成活(氧化磷酸化)和细胞死亡(凋亡)均与线粒体功能有关，特别是呼吸链的氧化磷酸化异常与许多人类疾病有关。自从Luft等［1］首次报道1例线粒体肌病以来，因线粒体功能障碍导致的疾病已累及全身多个系统，其中以神经系统和肌肉系统受累表现突出，近年来有发现线粒体与各种肿瘤的发生有密切关系［2］。……