王 蕾

(泰山医学院附属泰山医院泌尿内二科，山东 泰安 271000)

促红细胞生成素(EPO)主要是由成人肾脏产生的一种糖蛋白激素，能特异性地作用于哺乳动物的红系祖细胞，促进其增殖、分化并抑制其凋亡。近年来，EPO的细胞保护作用和器官保护作用备受关注，EPOR不仅存在于红系生成细胞，还存在于全身各组织器官。重组人红细胞生成素(rHuEPO)被认为是一种全身性的、心血管系统和肢体保护性细胞因子。其中rHuEPO对神经系统和心血管系统研究较多，本实验通过体外系膜细胞培养技术，给予高糖环境下rHuEPO刺激，观察对细胞的增殖和分泌MCP-1的影响。

1 材料与方法

1.1材料 大鼠MCs购自HBZY-1；rHuEPO购自沈阳三生有限公司；10%胎牛血清为杭州四季清生物工程材料有限公司产品；RPMI-1640培养液为Gibco公司产品；CCK-8试剂盒由日本同仁化学研究所提供。大鼠MCP-1引物及探针由上海英俊生物有限公司提供，Trizol总RNA提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司；RNA逆转录试剂盒购自TOYOBO东洋纺生物工程有限公司；Icycler IQ荧光定量PCR仪(BIO-RAD公司)。

1.2方法

1.2.1细胞培养 HBZY-1用RPMI-1640培养基，培养液由10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素、10%FBS、RPMI-1640培养液组成。当生长至90%贴壁时，用0.05% EDTA+0.05%胰蛋白酶消化细胞传代，细胞计数，以1×105/ml 细胞密度接种于96孔板，4～6代后细胞进入对数生长期，加入30 mmol/L的高糖浓度和不同浓度(1，10，50，100 IU/ml)的rHuEPO，在不同时间进行各种指标检测。

1.2.2实验分组 取4～6代培养系膜细胞，加入无血清的RPMI-1640培养液培养24 h，使之转入G0期，然后按培养液中含葡萄糖、rHuEPO浓度不同分为对照组和实验组。实验分组：(1)正常对照组(NG)：葡萄糖浓度为5 mmol/L+2.5% FBS 的RPMI-1640；……