诸葛静

Toll样受体 4(toll -like receptor,TLR4)是脂多糖的天然受体,在调节急性炎症反应、 细胞信号转导和细胞凋亡中起重要作用。炎症性组织中都可以检测到TLR4的表达，且不管在病毒感染性疾病组织还是在细菌感染造成的炎症疾病组织中都可见TLR4表达增高[1,2],提示TLR4介导的天然免疫反应是炎症性疾病发生的起点，同时TLR4介导细菌感染性免疫反应也可能参与了病毒性炎性病变的发生，具体机制并不清楚。我们通过研究TLR4在HPV感染导致的宫颈疾病中的表达，研究其与HPV感染的相关的疾病间的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

研究对象选自妇科门诊及普查中采用TCT发现的可疑者，再行阴道镜行宫颈多点活检病理检查，诊断为宫颈炎合并HPV感染、CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期和宫颈癌的患者。阴道镜检测同时，取宫颈脱落细胞进行杂交捕获(Hybridization Capture)HPV DNA分析，确定HPV16感染才记入,所有患者均为新发患者。每亚组选择20例，同时使用健康的宫颈组织(如因子宫肌瘤、宫血等切除子宫)20例作为对照组。

1.2 方法

将新鲜组织放在液氮中保存，实验前研磨成粉末后，取0.5 g匀浆研碎组织裂解后提取总RNA，纯度A260/A280在1.8～2.2之间，逆转录后再PCR扩增，产物凝胶电泳后置凝胶成像系统分析。内对照β-actin的mRNA分别与TLR4和HPV16 E7的mRNA在同一体系共同扩增，以降低干扰因素对实验结果的影响。凝胶在图像系统上分析出所有mRNA的密度后，将β-actin的密度作为内对照，目的基因与内对照的密度之比为目的基因表达的相对值。每组实验重复3次，取平均值。TLR4上游引物5'-AATCTAGAGCACTTGGACCTTTCC，下游引物3'-GGGTTCAGGGACAGGTCTAAAGA；E7上游引物5'-ATGAGCAATTACCCGACAGC，下游引物3'-AGCCCATTAACAGCTCTTGC；……