李 华，王小洁，麦康森，张文兵，徐 玮，刘付志国

（中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003）

饲料维生素C添加量对半滑舌鳎幼鱼存活、生长、及组织中抗坏血酸含量的影响＊

李 华，王小洁＊＊，麦康森，张文兵，徐 玮，刘付志国

（中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003）

在半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）基础饲料中添加0、10、50、150、450和1 500mg／kg的维生素C（维生素C多聚磷酸酯形式），制成6种实验饲料，分别对初始体质量为（4.21±0.02）g（实验Ⅰ）、（116.93±0.91）g（实验Ⅱ）2个规格各6组半滑舌鳎进行10周的摄食生长试验。每组设3个重复，每个重复分别60尾（实验Ⅰ）、18尾（实验Ⅱ），研究饲料中维生素C对半滑舌鳎幼鱼存活、生长和组织中抗坏血酸含量的影响。结果表明，实验Ⅰ中，半滑舌鳎的存活率、增重率、特定增长率和饲料转化率随着饲料中维生素C添加量增加，有上升趋势，但差异不显著（P＞0.05）。肝脏、肾脏、肌肉中抗坏血酸含量均随饲料中维生素C添加量增加而显著上升（P＜0.05）；实验Ⅱ中，半滑舌鳎的存活率、饲料转化率随饲料中维生素C添加量增加有上升趋势，但差异不显著（P＞0.05），增重率和特定生长率不受饲料中维生素C显著影响（P＞0.05）。当饲料中维生素C添加量超过50mg／kg时，随添加量增加肝脏、肾脏、肌肉中抗坏血酸含量均显著上升并高于对照组（P＜0.05）。以上结果表明在本实验条件下，半滑舌鳎幼鱼基础饲料中无需添加额外的维生素C即可满足幼鱼正常生长发育的需要。

半滑舌鳎；维生素C；存活；生长；组织抗坏血酸

维生素C，或称L－抗坏血酸，在鱼类的生长过程中发挥重要作用［1－2］，可促进铁的吸收，是鱼类组织胶原蛋白合成过程中脯氨酸羟基化必需的物质，具有广泛的生理和免疫作用，能够促进养殖动物快速生长，缓解养殖鱼类的应激状态，增强机体抵抗病原微生物感染能力及免疫功能［3－6］。多脊椎动物具有合成维生素C的能力，但大多数鱼类由于体内缺乏L－古洛内酯氧化酶，不能合成维生素C，因而必须从食物中获取［7］。关于养殖鱼类饲料中维生素C需要量已有不少报道，这些研究结果因鱼的品种、维生素C剂型及评价指标不同而不尽一致。

半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）是我国第1种进行人工养殖的舌鳎科鱼类，俗称牛舌头、鳎目、鳎米、龙利，属鲽形目Pleuronectiformes、舌鳎科Cynoglossidae，自然分布于我国沿海海区，以渤海、黄海为多，是名贵的底栖大型鱼类［8－10］。目前，由于具有良好的市场经济价值，有“富贵鱼”、“海洋中的黄金”之称［11］。半滑舌鳎生长快，适应范围广，营养价值高，是我国北方沿海极具养殖潜力的海水养殖鱼类之一。但是，其营养需求研究才刚刚开始起步，目前仅见蛋白质需求、饲料中适宜的脂肪及碳水化合物水平［12］，而关于半滑舌鳎维生素、矿物质等微量元素营养需要量的研究还未见报道。鱼类对维生素C的需求量受不同生长发育阶段的影响。在鱼类生长初始阶段，其生长迅速，代谢旺盛，因此需要更多的维生素C来维持其正常的生理功能［13］，较大的鱼体，由于其体内贮存维生素C较多，生长慢，消耗率低，从而导致了较低的维生素C需求量［14］。本实验研究饲料中维生素C添加水平对半滑舌鳎2个规格幼鱼存活、生长及组织中抗坏血酸积累量的影响，以期为半滑舌鳎颗粒饲料配制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验饲料

以鱼粉、大豆浓缩蛋白为蛋白源，鱼油、豆油、大豆卵磷脂为脂肪源，面粉作为糖源配制基础饲料（见表1）。在基础饲料中分别添加相当于抗坏血酸含量为0、10、50、150、450和1 500mg／kg的维生素C多聚磷酸酯（LAPP），从而配制出6种实验饲料，其中基础饲料中含有维生素C 3.59mg／kg。所有原料经粉碎后过60目筛。将所有原料和鱼油、豆油、大豆卵磷脂混匀，然后加水制成团状，制成直径3mm的颗粒后鼓风烘干12h，于－20℃冷库保存备用。

表1 基础饲料配方及其营养成分Table 1 Ingredient and proximate composition of the basal diet

1.2 实验鱼及饲养管理

生长实验Ⅰ、Ⅱ分别选用当年同一批孵化的规格一致的半滑舌鳎幼鱼，饲养实验于烟台海阳黄海水产有限公司进行。试验采用流水养殖系统，流速保持在10L／min左右。实验开始前先用基础饲料进行驯化，为期2周。实验开始前，将实验鱼禁食24h。实验Ⅰ挑选均体质量为（4.21±0.2）g的实验鱼随机分成6组，每组设置3个重复，每个重复60尾。每天饱食投喂3次（06：00、14：00和22：00），实验为期10周。实验期间水温变化范围20～10℃，盐度变化范围24～26，溶氧含量≥6mg／L，pH＝7.9～8.0。实验Ⅱ挑选均体质量为（116.93±0.93）g的实验鱼随机分成6组，每组设置3个重复，每个重复18尾。每天饱食投喂2次（06：30和18：30），实验为期10周。实验期间水温变化范围24.1～18.8℃，盐度变化范围24～26，溶氧含量≥6mg／L，pH＝7.9～8.0。

1.3 样品收集

实验结束时，将鱼禁食24h，然后确认每个桶中鱼的数量并称鱼体总质量。实验Ⅰ、Ⅱ每个桶分别随机取10、5条鱼保存于－20℃中，用于鱼体成分测定。然后再从每个桶中分别随机取10、5条鱼，保存于－20℃中至组织抗坏血酸分析时。组织抗坏血酸分析时冰浴中解剖取其肝脏、肾脏和背部相同部位的肌肉分别测定抗坏血酸含量。

1.4 样品分析测定方法

半滑舌鳎鱼体成分测定参照AOAC［15］的方法：鱼体粗蛋白含量采用凯氏自动定氮仪测定，鱼体粗脂肪含量采用索氏抽提仪测定，鱼体灰分含量采用马福炉灼烧24h后测定，鱼体水分含量采用鼓风烘箱105℃烘干24h后测定。

组织中维生素C的测定参照Ai等的方法进行［16］。称取肝脏或肌肉约2g，肾脏约1g，分别放到50、5mL离心管中，分别加入9、4倍体积预冷的5%偏磷酸溶液，在冰浴状态下匀浆2min，然后离心6min（2 739r／min）。上清液用0.22μm的滤膜过滤后进行高效液相色谱分析。仪器为Agilent 1100型HPLC仪，Zobar C18反相色谱柱，4.6nm×250nm。流动相为0.05mol／L KH2PO4（用磷酸将pH值调至3.0），流速为0.6mL／min，检测波长为254nm，柱温30℃，进样量为20μL。适量的抗坏血酸（Sigma Chemicals Co.）溶解在超纯水中作为标准样品。

1.5 数据计算和统计方法

存活率SR（%）＝终末尾数／初始尾数×100；

增重率WGR（%）＝（末体质量－初体质量）／初体质量×100；

特定生长率SGR＝（ln末体质量－ln初体质量）／养殖天数×100；

饲料转化率FER＝鱼体增重／饲料摄入量［17］。

采用SPSS 16.0for Windows对所得数据进行单因子方差分析（ANOVA），若差异达到显著，则进行Tukey多重比较（Tukey HSD test），显著水平为0.05。实验所得数据表示为平均值±标准误（mean±S.E.，n＝3）。

2 结果

2.1 半滑舌鳎存活和生长

实验结束时，实验Ⅰ、Ⅱ未添加维生素C的饲料组均未发现活力下降、厌食、脊柱弯曲或鳍下出血等维生素C缺乏症，但是未添加维生素C的饲料组死亡率升高，随着饲料中维生素C添加量增加，存活率有上升趋势但各处理组没有显著差异（P＞0.05）（见表2）。实验Ⅰ中，鱼体增重率、特定增长率和饲料转化率随着饲料中维生素C添加量增加，有上升趋势，但差异不显著（P＞0.05）。实验Ⅱ中，饲料转化率随饲料中维生素C添加量增加有上升趋势，但差异不显著（P＞0.05），增重率和特定生长率无显著差异（P＞0.05）。

表2 饲料中添加维生素C对半滑舌鳎存活率、增重率、特定增长率及饲料转化率的影响（平均值±标准误，n＝3）Table 2 SR，WGR，SGR and FER of juvenile tonguefish fed the experimental diet for 10weeks（mean±S.E.，n＝3）

2.2 半滑舌鳎水分、粗蛋白、粗脂肪及灰分含量

由表3可以看出，经过10周的生长实验，饲料中不同的维生素C水平对鱼体的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量没有显著影响（P＞0.05）（见表3）。实验Ⅰ、Ⅱ水分含量分别为80.31%～80.87%、76.75%～77.18%，粗蛋白12.97%～13.52%、15.93%～16.91%；粗脂肪在3.94%～4.14%、4.16%～4.49%，灰分1.95%～2.02%、2.18%～2.32%。

表3 饲料维生素C对半滑舌鳎鱼体成分的影响（平均值±标准误，n＝3）Table 3 Whole－body composition of tonguefish fed the experimental diet for 10weeks（%fresh weight）（mean±S.E.，n＝3）

2.3 半滑舌鳎组织中抗坏血酸含量

由表4可见，肝脏抗坏血酸含量随饲料中维生素C添加量增加而显著上升（P＜0.05），超过50mg／kg添加组的肾脏和肌肉中抗坏血酸含量随添加量增加显著上升且显著高于对照组和10mg／kg添加组（P＜0.05）；当饲料中维生素C添加量超过50mg／kg时，随添加量增加肝脏、肾脏、肌肉中抗坏血酸含量均显著上升并高于对照组（P＜0.05）。

表4 饲料维生素C对半滑舌鳎肝脏、肾脏和肌肉中抗坏血酸含量的影响（平均值±标准误，n＝3）Table 4 Liver，kidney and muscle ascorbic acid concentrations of tonguefish fed the experimental diet（mean±S.E.，n＝3）

3 讨论

对点带石斑鱼（Epinephelus coioides）［18］、大黄鱼（Pseudosciaena crocea）［19］、金头鲷（Sparus aurata）［20］等的研究表明，饲料中添加维生素C能提高鱼体存活率。经过10周的生长实验，实验Ⅰ、Ⅱ中，饲料中维生素C添加量的增加提高了半滑舌鳎幼鱼的存活率，但影响不显著（P＞0.05）。对照组半滑舌鳎幼鱼并未出现之前在其它鱼类维生素C需要量的研究如斑点叉尾鮰（Ictalurus punctatus）［21］、印度鲤（Cirrhina mrigala）［22］、日本鹦鹉鱼（Oplegnathus fasciatus）幼鱼［23］和杂交罗非鱼（Orechromis niloticus×O.aureus）［24］中报道的生长不良、摄食下降、脊柱侧凸和脊柱前弯等缺乏症。本研究中，饲料中添加维生素C对半滑舌鳎幼鱼的生长无显著影响，这与之前的大西洋鲑（Salmo salar L.）［25］、金头鲷［20］及大黄鱼［19］研究中的结果相似。Henrique等对金头鲷的研究中认为，由于对照组肝脏和脾脏中抗坏血酸含量已经消耗到极低水平（脾脏0.5μg／g，肝脏3.5μg／g），故认为可能是由于组织中初始储存量较高，使得在抗坏血酸消耗期仍能保持正常的生理功能，而非因为原料中含有维生素C。Ai等认为维生素C对大黄鱼生长影响不显著的原因有两点：其一研究中大黄鱼SGR相对较低，代谢率相应较低，因此对维生素C的需求量也相应较低；其二研究用大黄鱼规格较大，可能储存较多的维生素C，因此需要更长的时间来消耗。本研究对照组组织中抗坏血酸含量均很低，故生长差异不显著很可能由于半滑舌鳎幼鱼初始组织中抗坏血酸积累量比较大，在10周的实验周期内足以维持半滑舌鳎的正常生理功能，亦不出现维生素C缺乏症，而不是基础饲料中含有的少量维生素C（3.59mg／kg）。因此，建议进行更长周期的生长实验来研究维生素C对半滑舌鳎的生长的影响。

实验Ⅰ、Ⅱ中，对半滑舌鳎鱼体组成的分析表明，2个规格鱼体中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量都不受饲料中维生素C添加水平的影响。这与对罗非鱼（Oreochro misspilurus）［1］、翘嘴红鲌（Culter alburnus）［26］及军曹鱼（Rachycenlron canadumL.）［27］的研究结果一致。但对点带石斑鱼［18］的研究显示，饲料中维生素C缺乏或过高的均可导致体脂含量下降，这可能是维生素C参与体脂肪代谢的结果，其作用机理有待进一步研究。

肝脏、肌肉及肾脏中的维生素C含量经常被用作评价鱼类维生素C营养状态的指标［16，19，28－30］。Dabrowski等［32］认为维持组织中维生素C稳定状态所需要的维生素C即为维生素C最适需要量。在本研究中，两个实验半滑舌鳎肝脏、肾脏及肌肉中的维生素C含量均随着饲料维生素C水平升高而显著升高，但没有出现在对鲈鱼（Lateolabrax japonicas）、大西洋鲑、大黄鱼等研究中报道的随着饲料维生素C添加量增加肝脏维生素C含量增加并最终达到稳定的情况［16，19，21，24－25，31－34］，而Shiau和Hsu也认为饲料中维生素C的增加不会使罗非鱼肝脏中维生素C含量达到比较稳定的状态［24］。这些差异可能主要是因为实验鱼种类、实验饲料和不同的维生素C添加量所致。这也说明要达到组织中维生素C稳态，可能需要更高的饲料维生素C添加量。建议今后研究中进一步提高维生素C最高添加量，来进一步研究饲料中添加维生素C对组织中抗坏血酸含量的影响。

本实验条件下，在饲料中添加维生素C对半滑舌鳎2个规格幼鱼的存活、生长均没有产生显著影响，只显著提高了组织中抗坏血酸的含量。因此，就存活、生长而言，在本实验条件下，本基础饲料配方足以满足半滑舌鳎2个规格幼鱼生长发育的营养需要，无需额外补充维生素C。

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Effects of the Different Levels of Dietary Vitamin C on Survival，Growth and Tissue Ascorbic Acid Concentration in Tonguefish Cynoglossus semilaevis

LI Hua，WANG Xiao－Jie，MAI Kang－Sen，ZHANG Wen－Bing，XU Wei，LIUFU Zhi－Guo
（The Key Laboratory of Mariculture，Ministry of Education，Ocean University of China，Qingdao 266003，China）

This study was conducted to investigate the effect of dietary vitamin C on survival，growth and tissue ascorbic acid concentration in tonguefish（Cynoglossus semilaevis）.0，10，50，150，450and 1500mg／kg vitamin C（L－ascorbyl－2－polyphosphate）were supplemented respectively in basal diet to formulate six practical diets.Two 10－week feeding experiments were carried out using different size of fish（initial body weight：（4.21±0.02）g in ExperimentⅠand（116.93±0.91）g in ExperimentⅡ）.Each diet of the two experiments was randomly fed to triplicate groups of fish which showed apparent satiation in floating water system.Each group was stocked with 60and 18fish respectively in experimentⅠandⅡ.The results showed that：In experimentⅠ：Survival rate，weight gain rate，specific growth rate and feed efficiency ratio showed an increasing tendency with the increase of dietary vitamin C，but without significant difference（P＞0.05）.The ascorbic acid concentrations in liver，kidney and muscle increased significantly with increasing dietary vitamin C（P＜0.05）intake.In experimentⅡ：Survival rate，weight gain rate，specific growth rate and feed efficiency ratio were not influenced significantly by dietary vitamin C.When supplemented with more than 50mg／kg vitamin C，the ascorbic acid concentrations in liver，kidney，and muscle increased significantly with the increase of dietary vitamin C，which significantly higher than the unsupplemented group（P＜0.05）.The results above suggest that，though dietary vitamin C has benificial effect on survival to some extent，it is not necessary to supply extra vitamin C in the basic diet of tonguefish under the present experimental conditions.

Cynoglossus semilaevis；vitamin C；survival；growth；tissue ascorbic acid concentration

S963.73；S965.399

A

1672－5174（2012）1－2－075－06

国家鲆鲽类产业技术体系项目（nycytx－50－G07）资助

2011－03－03；

2011－04－27

李 华（1984－），女，硕士生。E－mail：lihua2011666＠163.com

＊＊通讯作者：E－mail：xjwang＠ouc.edu.cn

责任编辑 王 莉