王若天，钱 明，田 园

(1.琼海市人民医院，海南 琼海，571400;2.中山大学 附属第五医院，广东 珠海，519000;3.华中科技大学 同济医学院 附属武汉中心医院，湖北 武汉 430014)

胰腺癌恶性程度高，进展快，具有发现晚、病程短、转移早、预后差等特点，号称“癌中之王”［1］。吉西他滨是治疗进展期胰腺癌首选的化疗药物，但由于胰腺癌细胞获得性或内在的耐药性使其总有效率不足20%。近年来吉西他滨联合非细胞毒药物以增强其化疗敏感性成为研究热点。本研究在细胞水平观察姜黄素联合吉西他滨对人胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响，为临床用药提供参考。

1 材料

姜黄素(纯度≥98%，美国Sigma公司);吉西他滨(纯度≥97%，美国礼来公司);CCK-8试剂盒(碧云天生物技术研究所);RPMI 1640培养基(Gibco公司);小牛血清(杭州四季清生物工程有限公司)。

人胰腺癌Panc-1细胞株(中国科学院上海细胞生物研究所)。

Labexim LMR SA型酶标仪(奥地利)。

2 方法

2.1 溶液配制

姜黄素溶液:称取姜黄素0.368 g，用少量二甲亚砜(DMSO)溶解，再用三蒸水稀释至100 mL，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基稀释至60 μmol/L，4℃避光保存［2］。吉西他滨溶液:用无菌生理盐水配成0.2 mol/L，再用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基稀释至20 μmol/L。

2.2 细胞培养及分组

Panc-1细胞株培养于含10% 小牛血清、100 μg/mL青霉素和 100 μg/mL链霉素的 RPMI 1640培养液中，置于37℃，饱和湿度，5%CO2培养箱中培养。待细胞单层贴壁，生长至70% ～80% 融合时用胰蛋白酶消化传代。分为4组:对照组(培养液)、姜黄素组(60 μmol/L)、吉西他滨组(20 μmol/L)、联合组(60 μmol/L姜黄素+20 μmol/L吉西他滨)。

2.3 CCK-8法检测各组Panc-1细胞增殖抑制率

Panc-1细胞制成单细胞悬液，以4×103个/孔接种到96孔板，每孔100 μL，贴壁后，按照细胞分组加入不同的药物溶液200 μL，对照组加含10%小牛血清的RPMI 1640培养基，培养24，48和72 h，各6复孔。药物作用结束前 1 h，各孔加入 CCK-8 0.01 mL，继续培养1 h，同时设置空白组 (用磷酸盐缓冲液代替细胞悬液和药物溶液)，用酶标仪测定450 nm波长处的吸光度(A)值，细胞存活率(%)=(A实验组-A空白)/(A对照组-A空白)×100%。实验重复3次。

2.4 统计学处理

应用SPSS13.0统计软件，采用重复测量的方差分析进行检验，所有检验均为双侧检验，以α=0.05作为检验水准。

3 结果

结果见表1。姜黄素组、吉西他滨组和联合组的A值均明显低于对照组(P＜0.05或0.01);联合组A值显著低于姜黄素组和吉西他滨组(P＜0.05);联合组的细胞存活率均明显比单独用药组低。姜黄素和吉西他滨单独作用以及姜黄素联合吉西他滨组均能明显抑制Panc-1细胞增殖，呈时间依赖性;姜黄素联合吉西他滨组抑制Panc-1细胞增殖作用明显强于任一单独用药组，且呈时间依赖性。

4 讨论

表1 姜黄素联合吉西他滨对人胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响(n=3)

姜黄素是从姜科植物姜黄中提取的β-二酮多酚类化合物，具有抑制癌细胞增殖，诱导癌细胞凋亡的抗癌活性，最近被认为是一种潜在的第3代抗癌化疗药。已有研究表明，姜黄素能有效抑制人类胰腺癌细胞株SW1990增殖［3］，但其是否能增强化疗药物对胰腺癌细胞Panc-1的作用报道甚少。

曾勇等［4］对人胰腺癌细胞株BxPC-3的研究表明，大黄素联合吉西他滨对BxPC-3细胞增殖具有明显抑制作用，且强于任一单独用药。本研究进一步观察姜黄素联合吉西他滨对人胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响，结果姜黄素和吉西他滨单独用药可以抑制Panc-1细胞增殖，两药联合应用抑制细胞增殖的作用明显强于单独用药组。分析联合用药的优势:①姜黄素能同时作用于人胰腺癌Panc-1细胞转录、合成蛋白等多个靶点，从多个环节抑制癌细胞生长;②胰腺癌细胞对吉西他滨耐药与其核因子-κB(NF-κB)处于高度活化状态有密切关系，IκBα的磷酸化是NF-κB活化的关键步骤。姜黄素可以通过下调IκBα磷酸化，减少Panc-1细胞NF-κB阻抑物IκBα 蛋白，从而降低 NF-κB 活性［5］。总之，姜黄素联合吉西他滨对人胰腺癌Panc-1细胞增殖具有明显的抑制作用，其具体机制尚有待进一步研究。

［1］ 朱志霞，张为民，贾 刚，等.吉西他滨与培美曲塞对人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长的体外作用［J］.南方医科大学学报，2010，30(1):149-152.

［2］ 徐克平，吴延虎，陈亦江.姜黄素抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞的凋亡［J］.江苏医药，2007，33(5):469-470.

［3］ 杨 芳，赵 秋，王 渝，等.姜黄素抑制STAT3信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响［J］.世界华人消化杂志，2011，19(30):3149-3153.

［4］ 曾 勇，刘 岸，童洪飞，等.大黄素联合吉西他滨对体外人胰腺癌细胞株BxPC-3生长及凋亡的影响［J］.中国中西医结合杂志，2011，31(4):552-554.

［5］ 田 芳，柴玉荣，江亚南，等.姜黄素通过下调 IκBα磷酸化抑制食管鳞癌细胞的体外增殖［J］.基础医学与临床，2011，31(7):767-772.