王若天，钱 明，田 园

(1.琼海市人民医院，海南 琼海，571400;2.中山大学 附属第五医院，广东 珠海，519000;3.华中科技大学 同济医学院 附属武汉中心医院，湖北 武汉 430014)

胰腺癌恶性程度高，进展快，具有发现晚、病程短、转移早、预后差等特点，号称“癌中之王”［1］。吉西他滨是治疗进展期胰腺癌首选的化疗药物，但由于胰腺癌细胞获得性或内在的耐药性使其总有效率不足20%。近年来吉西他滨联合非细胞毒药物以增强其化疗敏感性成为研究热点。本研究在细胞水平观察姜黄素联合吉西他滨对人胰腺癌Panc-1细胞增殖的影响，为临床用药提供参考。

1 材料

姜黄素(纯度≥98%，美国Sigma公司);吉西他滨(纯度≥97%，美国礼来公司);CCK-8试剂盒(碧云天生物技术研究所);RPMI 1640培养基(Gibco公司);小牛血清(杭州四季清生物工程有限公司)。

人胰腺癌Panc-1细胞株(中国科学院上海细胞生物研究所)。

Labexim LMR SA型酶标仪(奥地利)。

2 方法

2.1 溶液配制

姜黄素溶液:称取姜黄素0.368 g，用少量二甲亚砜(DMSO)溶解，再用三蒸水稀释至100 mL，用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基稀释至60 μmol/L，4℃避光保存［2］。吉西他滨溶液:用无菌生理盐水配成0.2 mol/L，再用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基稀释至20 μmol/L。

2.2 细胞培养及分组

Panc-1细胞株培养于含10% 小牛血清、100 μg/mL青霉素和 100 μg/mL链霉素的 RPMI 1640培养液中，置于37℃，饱和湿度，5%CO2培养箱中培养。待细胞单层贴壁，生长至70% ～80% 融合时用胰蛋白酶消化传代。分为4组:对照组(培养液)、姜黄素组(60 μmol/L)、吉西他滨组(20 μmol/L)、联合组(60 μmol/L姜黄素+20 μmol/L吉西他滨)。

2.3 CCK-8法检测各组Panc-1细胞增殖抑制率

Panc-1细胞制成单细胞悬液，以4×103个/孔接种到96孔板，每孔100 μL，贴壁后，按照细胞分组加入不同的药物溶液200 μL，对照组加含10%小牛血清的RPMI 1640培养基，培养24，48和72 h，各6复孔。……