谢 琦，李 娟，王凤山

(1.桂林医学院 生物技术学院，广西 桂林 541004;2.山东大学 药学院生化与生物技术药物研究所，山东 济南 250012)

胸腺五肽(TP5)是一种免疫调节活性较强的多肽药物，但它较短的半衰期(30 s)影响了其疗效的发挥［1］。胸腺素 α1(Tα1)具有与 TP5相似的生物活性与临床用途，其血浆半衰期(t1/2)长达1.5 h［2］。为了快速、大量获得在活性和稳定性方面都优于TP5和Tα1的多肽药物，我们构建了与GST基因融合表达的胸腺融合肽Tα1-TP5表达菌株，在异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的诱导下实现了高效可溶性表达［3］。

IPTG作为乳糖类似物，是一种高效的重组蛋白表达诱导剂，但它对人体具有潜在的毒性［4］，而且价格昂贵，使其在基因工程药物大规模生产中的应用受到限制。乳糖是一种有潜力的可以替代IPTG的诱导剂，乳糖进入细胞后经过β-半乳糖苷酶的作用转化为异乳糖，进而起到诱导剂的作用［5-6］。乳糖没有毒性且价格低廉，用乳糖替代IPTG已成为目前研究的热点。本研究以乳糖作为诱导剂，在摇瓶发酵条件下研究了不同培养基、诱导剂浓度、诱导时机、诱导时间、诱导温度和诱导方式对目的肽Tα1-TP5表达的影响，旨在为实现Tα1-TP5低成本、高产量的大规模生产奠定基础。

1 材料

含pGEX-4T-1/Tα1-TP5重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)，由山东大学药学院生化与生物技术药物实验室构建。

酵母粉、蛋白胨、丙烯酰胺(Acr)、甲叉双丙烯酰胺(Bis)，BBI公司;IPTG，Merck公司;其余试剂均为国产分析纯。

2 方法

2.1 培养基的配制

LB培养基:酵母粉0.5%，蛋白胨1%，氯化钠1%，121℃灭菌20 min;TB培养基:酵母粉2.4%，蛋白胨1.2%，甘油0.4%，磷酸二氢钾17 mmol/L，磷酸氢二钾72 mmol/L，高压灭菌时磷酸盐与其它组分分开，待溶液冷却至60℃以下后混合。……