李 霞，韩 凤，何 睿，焦艳华，梁媛媛，陈灿玉，谢 恬

（杭州师范大学生物医药与健康研究中心，浙江杭州 310012）

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

李 霞，韩 凤，何 睿，焦艳华，梁媛媛，陈灿玉，谢 恬

（杭州师范大学生物医药与健康研究中心，浙江杭州 310012）

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶，对其酶学性质进行表征，分析了温度、pH对酶促反应的影响，考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯化的番薯过氧化物酶比活力为6 930U／mg，SDS-PAGE显示一条带，分子量为34 000，RZ值为2.酶反应的最适pH在5.5附近，最适温度为70℃；在中性偏碱性条件下酶的稳定性非常高，60℃保温1h，酶活力残余60%.结果表明番薯过氧化物酶是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶.

番薯；过氧化物酶；纯化与性质

过氧化物酶是一类可催化由过氧化氢参与的氧化各种还原剂的氧化酶，广泛存在于动物、植物和微生物体内，可应用于酶免疫测定、药物诊断、生物传感器、有机合成、水污染治理等［1］.辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）最早被作为标记酶，广泛应用于化学发光酶联免疫分析（chemiluminescent enzyme immunoassay，CL-ELISA）中.但HRP在催化Luminol-H2O2发光体系中，与发光底物反应不稳定，信号衰减迅速，需添加增强剂加强发光强度才能满足检测要求，并且高温条件下不稳定.近年来相继发现一些植物过氧化物酶，如Arthromycesramonusperoxidase（ARP）［2］、palm tree leaves peroxidase（PTP）［3］和soya beans peroxidase（SbP）［4－5］，不需要增强剂即可催化鲁米诺发光底物发光，且发光灵敏度高，发光时效长.其中SbP是继HRP后研究最为深入的……