侯永杰，李 杰，李庆华，王建人，薛乐勋#

1)郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州 450001 2)河南中医学院生理教研室郑州 450008

#通讯作者，男，1944年2月生，教授，博士研究生导师，研究方向:肿瘤标志物与基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cn

杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测*

侯永杰1)，李 杰1)，李庆华1)，王建人2)，薛乐勋1)#

1)郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州 450001 2)河南中医学院生理教研室郑州 450008

#通讯作者，男，1944年2月生，教授，博士研究生导师，研究方向:肿瘤标志物与基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cn

杜氏盐藻;stt3a;酵母双杂交;鞭毛再生

目的:观察杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a的酵母双杂交诱饵载体表达产物对酵母细胞有无毒害作用并检测其自激活作用。方法:应用PCR方法获得stt3a可溶端的基因片段，将基因片段按正确的方向插入到酵母表达质粒pGBKT7中，经限制性内酶切鉴定正确后，用PEG/LiAc法转化到酵母菌株Y187中，并通过表型筛选检测诱饵蛋白有无毒性和自激活作用。结果:成功获得了stt3a可溶端的基因片段，其表达的蛋白对酵母菌株Y187无毒害，报告基因-半乳糖苷酶活性没有被诱导。结论:酵母双杂交GAL4系统可以被用来研究杜氏盐藻中与stt3a相互作用的蛋白。

酵母双杂交系统是一个研究蛋白质间相互作用的技术平台，由于是在活细胞内进行，因此能够在某种程度上反映蛋白质在正常生理条件下的活性状态，这是体外任何实验无法模拟的。stt3a基因是寡糖基转移酶的催化亚基，可以有效促使新生肽的糖基化修饰［1-2］，它在已知的寡糖基转移酶亚基中是最保守的［3］。……