张永莉，李社莉，李宝莉，王炎林，施秉银，吕双燕，李亚

（1.延安大学附属医院内分泌科，陕西 延安 716000；2.延安大学医学院，陕西 延安 716000；3.西安交通大学第一附属医院内分泌科，西安 710061）

近年来，随着分子生物学的飞速发展，以及原位杂交免疫组化等先进技术的广泛应用，人们在颌下腺中陆续发现或分离提取出30多种生物活性物质，它们或直接分泌入血，或随唾液进入消化道再由胃肠吸收入血，对多种组织和细胞的生理活动起调节作用。其中有些因子完全达到激素的标准，故有人提出颌下腺具有内分泌和外分泌双重功能。我们先前曾用免疫组化的方法观察到大鼠颌下腺内含有降钙素（calcitomin，CT）免疫反应阳性细胞［1］，这就意味着颌下腺能分泌降钙素，为了证实这一结果，我们设计了本实验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：8 d生SD雄性大鼠，由西安交通大学医学院动物实验中心提供。

1.1.2 试剂：DMEM/F12培养液，由赛默飞世尔生物化学制品（北京）有限公司生产；胎牛血清，由兰州荣晔生物科技有限责任公司生产；兔抗角蛋白单克隆抗体（CK-8），北京博奥森生物技术有限公司产品；兔抗CT抗血清 由美国NeoMarkers公司生产；SP免疫组化染色试剂盒及DAB显色剂，由北京中杉金桥生物技术有限公司提供；敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅰ型为武汉BOSTER公司产品；地高辛标记的CT DNA寡核苷酸探针由北京奥科生物技术有限责任公司合成。

1.2 方法

1.2.1 大鼠颌下腺细胞培养方法：在无菌条件下，大鼠断颈处死后获得颌下腺，剪碎、消化、离心，用差速黏贴法清除纤维细胞，接种于培养瓶中培养，2～3 d后首次换液，8～9 d后进行传代培养，倒置显微镜下进行观察。……