牛广华 高玉洁 高明利 郭 鹤 王柏山 (辽宁中医药大学附属医院，沈阳 110032)

类风湿关节炎(Rheumatoid arthrits，RA)作为一种发病机理不同，治疗效果不佳，致残率很高的自身免疫性疾病，至今无满意的治疗药物，传统的慢作用抗风湿药副作用大，患者耐受性差，新型的生物制剂费用昂贵，不能口服，体内清除快，靶向性差，而骨髓间充质干细胞移植治疗从理论上可克服以上缺陷，是一种新的非常有前途的治疗手段。

骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是一种存在于骨髓中的非造血干细胞，具有自我更新、高度增殖及多向分化的能力。随着对BMSCs研究的不断深入，BMSCs自体或异体骨髓移植已经证实在治疗自身免疫病中有确切的疗效，并已成为治疗自身免疫病的一种新的趋势。

基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)在RA关节骨及软骨的破坏中发挥重要作用[1]。RA患者滑液及滑膜细胞均有MMPs的高表达[2]。MMP-2、MMP-9与RA的病情严重程度及关节破坏相关，MMP-2、MMP-9是明胶酶，其作用的底物是关节软骨的重要组成成分。动物实验也证实，MMP-2、MMP-9与RA的病情严重程度及关节破坏相关。

为此本项目通过BMSCs移植治疗小鼠Ⅱ型胶原性关节炎(CIA)的实验研究，观察BMSCs治疗胶原鼠组织中MMP-2及MMP-9表达的影响，并进一步探讨BMSCs影响MMP表达的调节机制，为BMSCs治疗人类RA提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂及药物 ①牛Ⅱ型胶原(collagen from bovine nasal septutm，C7809，5 mg，Sigma 公司);②弗氏完全佐剂(Fveunds complete adjuvant，098K8729-CAS 9007-81-2，10 ml，Sigma公司);③流式细胞仪抗体 PE-CD34，FITC标记的小鼠抗体(Pharmingen公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 BMSCs的体外分离和表型鉴定 ①以健康C57BL/6(H-2b)小鼠为供体，股骨、胫骨离断，自骨髓腔内获取骨髓标本，收集骨髓标本5份，按2∶1的比例加入Ficoll-Hypaque分离液(密度1.077)中，并采用梯度密度离心法分离单个核细胞，用PBS液洗涤3～4遍，用1 ml生理盐水重悬。……