孙化露，陈 冰，李树纯，陈素娟，彭大新

（扬州大学兽医学院 农业部畜禽传染病学重点开放实验室，江苏 扬州225009）

近年来鸭病呈逐渐增加的趋势，其中病毒性疾病包括鸭流感、鸭新城疫、鸭病毒性肝炎、鸭细小病毒病、鸭呼肠孤病毒感染、鸭瘟等；细菌性疾病包括鸭疫里默氏杆菌病、大肠杆菌病、沙门菌病和禽霍乱等，这些病给养鸭业带来了严重的危害。由于一些细菌为条件性致病菌，混合感染或继发感染后会造成更大的损失；加之细菌易产生耐药性，不同细菌之间可能存在耐药基因的传递。因此，有必要对鸭病中可能存在的细菌种类做出鉴定。我们从病死鸭的脏器中分离鉴定出一些细菌，并通过16SrDNA序列分析来确定其种属，探讨了鸭病中可能存在的细菌感染。

1 材料与方法

1.1 试 剂 YEAST EXTRACT、TRYPTONE等，购自英国 OXOID公司；16SrDNA Bacterial Identification PCR Kit、Agarose Gel DNA Purification Kit，购自TaKaRa公司；pGEM－T Easy载体，购自Promega公司；细菌微量生化反应管，购自杭州天和微生物试剂有限公司；麦康凯、琼脂粉及其他试剂，购自国药集团。

1.2 病料采集与培养 从病死或濒临死亡鸭子的心、肝、脾、脑等组织进行无菌分离，分别接种于普通LB琼脂、血清LB琼脂（含5%～10%的小牛血清）和麦康凯等培养基，于需氧和厌氧条件（蜡烛培养罐）下，37℃温箱中培养。18～24h记录菌落大小、颜色、形态等。

1.3 染色与镜检 挑取纯化后的单菌落，涂片后进行革兰染色，油镜下观察。

1.4 生化反应 取分离菌的纯培养物接种于微量生化反应管，37℃温箱中培养24h，记录生化反应结果［1］。

1.5 16SrDNA序列分析 采用煮沸裂解法制备细菌基因组……