猪布鲁菌S2 omp10基因缺失株的构建及特性
2011-11-22杨艳北韩文瑜孙长江
杨艳北,韩文瑜,孙长江
(吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062)
布鲁菌病是一种全球重要的人畜共患病,布鲁菌是该病的病原菌,革兰阴性细菌,兼性的细胞内寄生菌,可能引起不同种哺乳动物发病,包括人、牛、山羊、绵羊、猪、啮齿类及哺乳类动物。在大部分宿主动物中,该病主要引起生殖系统的损害,导致动物生产性能的下降[1]。布鲁菌病是一种慢性传染性疾病,预防主要是通过接种疫苗来实现的 ,现有的疫苗主要是减毒活疫苗 ,如S2、Rev.1、S19等,这些疫苗具有较好的免疫保护效果,但是仍然存在一定的毒力,可能导致动物发病[2]。1998年 Tibor等[3]对S19和Rev.1敲除编码基因P39,发现在小鼠模型上残余毒力和保护力无影响。2002年Eleonora Campos等[4]对S19以荧光素酶基因替代编码基因Bp26和Bmp18,发现在小鼠模型上毒力减弱,并且可以利用荧光素酶来检测。2011年 Chacon-Diaz等[5]发现绿色荧光蛋白可以做为布鲁菌疫苗的分子标记。减毒活疫苗在血清学检测上很难和自然感染相区分,导致利用疫苗免疫无法根除布鲁菌病。为了克服血清学诊断上的困难,通过现代分子生物学技术对布鲁菌进行分子标记是一种有效的途径。针对减毒活疫苗的这些缺点,本研究拟在减毒活疫苗株的基础上,对菌株进行改造,敲除布鲁菌的重要诊断抗原omp10基因[6-7],使疫苗株的毒力进一步降低,以区分疫苗免疫和自然感染。
1 材料与方法
1.1 菌株、细胞、质粒和载体 猪布鲁菌(brucella suis,S2)购自中国兽医药品监察所,大肠杆菌(Escherichia coli,DH5α),p BluescriptⅡsk(+)质粒为本室保存,p EMOC2质粒由德国Gerlach博士惠赠。……
