乔彩霞,高志强,张利峰,蒲 静,谷 强,张 伟,刘来福,刘金华,张鹤晓

(1.中国农业大学动物医学院,北京海淀100193;2.北京出入境检验检疫局,北京朝阳100026)

甲型 H 1N1流感发生后不久,世界卫生组织(WHO)在其网站上公布了美国疾病预防控制中心(CDC)推荐的荧光RT-PCR引物和探针[1],之后我国农业部、卫生部、国家质检总局和多家企业也相继研制了多种甲型H1N1流感特异性RT-PCR和荧光RT-PCR诊断试剂,并在我国较多实验室中广泛使用,在诊断和防控中发挥了重要作用[2]。但是,因为我国各级实验室条件、技术水平差异较大,加之甲型H1N 1流感诊断试剂的复杂多样,直接影响了结果的可比性和准确性。2010年10月高志强等利用体外转录的方法,研制了甲型 H1N1流感病毒(2009)和经典H 1N1猪流感病毒(SIV)的核酸检测标准物质,为完成检测试剂的标准化建立了基础[3]。为了合理评估各级实验室检测甲型H1N1流感病毒的能力,则需要开展甲型H 1N1流感病毒核酸检测的能力验证,以此衡量CNAS认可或申请认可实验室的检测资质,为实验室的认可评审工作提供依据,同时对现有的检测试剂和方法做出评估,发现可能存在的问题,整体提升我国甲型H 1N1流感的检测水平。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器设备 经典H1N1 SIV和甲型H1N1流感病毒(2009)HA、NA和M 基因片段体外转录标准物质,由本实验室制备和保存;Trizol试剂,购自Invitrogen公司;7900型荧光定量PCR仪,购自ABI公司。

1.2 主要检测方法及引物、探针 应用的检测技术主要包括甲型流感病毒通用 RT-PCR(包括荧光RT-PCR)、猪流感病毒 H 1亚型和N 1亚型通用RT-PCR(包括荧光 RT-PCR)等,所用引物和探针均由宝生物工程(大连)有限公司合成,详细序列信息和来源见表1。……