黄宏春 王秀敏 胡琳琳

重症急性胰腺炎患者肠黏膜通透性的高压液相色谱-示差法检测

黄宏春 王秀敏 胡琳琳

肠黏膜屏障功能破坏、肠源性细菌易位是重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)继发感染以及引起全身炎症反应综合征(SIRS)及多脏器功能不全综合征(MODS)的主要致病机制[1-3]。但目前尚缺乏检测SAP肠黏膜屏障功能的有效方法。本文采用高压液相色谱-示差法检测SAP患者口服糖分子探针乳果糖(LAC)、甘露醇(MAN)后尿液排泄率比值(LAC/MAN)，评估患者肠黏膜屏障功能，现报道如下。

一、材料和方法

1．研究对象：46例SAP患者均为2008年1月至2009年8月我院住院患者，男33例，女13例，年龄21～77岁，平均(56±14)岁。同时以25例本院健康职工作为健康对照组。SAP诊断符合中华医学会消化病分会胰腺病学组制定的标准[4]。

2．肠黏膜屏障功能的检测：受试者于住院次日晨起排空尿液后空腹经胃肠减压管注入糖溶液(100 ml双蒸水,5 g甘露醇,10 g乳果糖)。收集6 h尿液，计总量；取10 ml加少量防腐剂(硫柳汞：0.2 mg/ml)，置离心管，封口，-85°C保存待测。参考文献[5]，采用高压液相色谱仪(日本岛津公司，LC-6A，配备RID-6A示差检测器)检测SAP患者尿液LAC/MAN，评估患者肠黏膜通透性。色谱条件：色谱柱为Nucleosil(美国)NH2柱，10 μm (4.6 mm×250 mm id)；流动相为乙腈-水(70∶30，v/v)，流速1 ml/min；柱温35℃；示差检测器内加热温度为37℃，时间常数为1.0。

将冰冻贮存样品解冻、混匀，取5 ml 3000 r/min离心10 min，取上清液3 ml加5%醋酸2～3滴加热煮沸，冷却后再5000 r/min离心10 min，取上清液2 ml经阴阳离子交换树脂去除离子、0.22 μl滤器过滤后，取0.2 ml尿样品从进样口注入HPLC仪，由切换阀自动进样20 μl；当听到进样的声音以后立即开始记录，直至待测峰全部出现、基线平稳后停止记录。……