王立娜，苑春艳，李春，李庆章，高学军

（东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨150030）

奶山羊青春期乳腺发育重要基因RelA的全长克隆

王立娜，苑春艳，李春，李庆章，高学军

（东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨150030）

从本实验室已建立的关中奶山羊7个时期乳腺Long-SAGE标签库中筛选出在青春期高表达的RelA基因，用RACE方法克隆并获得关中奶山羊RelA基因的全长，将全长序列与NCBI GenBank中人（H.sapiens）和牛（Bos taurus）数据库进行同源性比对，证实用所选EST标签引物克隆出的基因全长是奶山羊RelA基因。

奶山羊；乳腺；RACE；RelA

0 引言

cDNA微阵列杂交技术（cDNA mivroarray hybridization）、长标签基因表达系列分析（Long Serial Analysis of Gene Expression，Long SAGE）等方法使具有潜在功能意义的EST（expressed sequence tag，EST）片段数量大量增加[1]，然而EST片段所对应的新基因全长序列的获得，仍然是进行新基因功能研究的障碍[2-5]，cDNA末端快速扩增（Rapid amplification of cDNA ends，RACE）技术使未知基因的快速扩增成为可能[6,7]。

目前，人、小鼠、牛等物种的核因子κB（NF-κB）亚单位RelA（V-rel reticuloendotheliosis viral oncogene homolog A(avian)，RelA）基因已经克隆出来，但是关于羊的RelA研究还没有报道。为进一步探讨RelA的功能，阐明其在乳腺中发挥的生物学作用，本研究拟通过已构建的奶山羊乳腺EST标签库获得的RelA特异性标签，采用RACE技术克隆关中奶山羊乳腺新基因RelA全长cDNA序列，为进一步研究基因RelA的功能奠定实验基础。

1 材料和方法

1.1 材料和仪器

关中奶山羊青春期乳腺组织（液氮保存），SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit（Code No：634914），Trizol（Code No:DRR02AG），pMD18-T载体，DNA Ladder 2000 Marker，PCR仪。

1.2 引物设计

根据本实验室已建立的关中奶山羊乳腺Long-SAGE标签库，选取RelA基因的EST标签，碱基序列为CTGATGGAGTACCCTGA，其NCBI BLAST结果在牛、人的RelA基因同源性为100%。以标签本身作为3'RACE基因特异性引物W6：5'–catgctgatggagtaccctga–3'，以3'RACE结果设计5'RACE的基因特异性引物RelA 1：5'–CCCGAGAGGAGGCCATTGGTGAG–3'。……