包秋华，陈永福，张家超，孙志宏，包艳，张和平

(内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室，呼和浩特010018)

一种快速定性和定量检测发酵乳中L.fermentum的方法

包秋华，陈永福，张家超，孙志宏，包艳，张和平

(内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室，呼和浩特010018)

通过比对发酵乳杆菌（L.fermentum）与其他乳酸菌的16S rRNA基因序列的异同，设计出L.fermentum的种属特异性引物，应用此引物进行种属特异性PCR和实时荧光定量PCR反应，通过琼脂糖凝胶电泳图谱和实时荧光定量PCR图谱分析，建立一种快速检测发酵乳中L.fermentum的定性和定量测定方法。

乳酸菌；发酵乳杆菌；PCR；实时荧光定量PCR

0 引言

目前对多菌复合的发酵乳样本中发酵乳杆菌(L.fermentum)的定性、定量检测方面缺乏科学、合理、快速的方法[1-5]，传统生理生化方法易受选择培养基、培养条件、菌种特性等因素影响，检测效率有限[1]。乳酸菌活菌数量是评价活性乳酸菌制品质量的重要指标[3,6-8]，平板菌落计数法是微生物学中最常见、最标准的一种活菌计数方法，但操作繁琐，耗时费力，对乳酸菌培养还需要厌氧装置[6]。与传统的理化鉴定和平板定量方法相比，16S rDNA基础上的PCR和实时荧光定量PCR方法检测乳酸菌更加快速，而且特异性和敏感性更强[1,4-5,7,9-10]。其中Dickson曾采用种属特异性引物成功定性分析了临床医学样本的L.fermentum[1]。本文设计种属特异性引物利用PCR和RT-PCR技术建立了一种快速定性、定量检测发酵乳中L.fermentum的方法。

1 实验

1.1 菌种和样本来源

标准菌株L.fermentum 1.1880，L.rhamnosus 1.2134，L.plantarum 1.2437，标准菌株L.acidophilus ATCC 4356，L.casei ATCC393；L.fermentum F6为本实验室从酸奶中分离得到具有益生特性的发酵乳杆菌[2,11]。……