王 媛，王 坦，王 玉，杨廷桐

研究表明乳腺癌的发生是基因调控失衡的结果，其生物学特性与多种癌基因的作用密切相关，TGF-β1有促进肿瘤侵袭，转移，上皮间叶转化（EMT）[1]，血管增生以及免疫抑制等多种作用。野生型p53（wt-p53)具有显著地肿瘤抑制作用，而突变型p53（mp-53）则具有致癌的作用。目前有关TGF-β1，wt-p53在乳腺癌的研究中极少报道。本研究运用血清学和免疫印迹技术分别检测了TGF-β1，wt-p53基因在乳腺癌组织中的表达，并探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 2010-03～2011-04笔者所在医院手术切除的标本，选取资料完整、病理组织学确诊的乳腺癌48例，其中淋巴结转移的31例，年龄31～62岁。并选取正常乳腺组织和癌旁组织作为对照。

1.1.2 主要试剂 兔抗人TGF-β1，p53多克隆一抗，羊抗兔辣根过氧化物酶标记的二抗，TGF-β1分子量为23 kD，wp-53分子量为53 kD，β-actin分子量为42 kD。均购自武汉博士德生物工程有限公司，显色剂购自北京中杉生物技术有限公司。ELISA检测试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。

1.2 方法 受试者抽取清晨空腹外周静脉血3 ml，-4℃冰箱保存待检测。采用ELISA法分别检测TGF-β1，p53含量，严格按试剂盒说明进行操作。

1.2.1 组织中总蛋白提取及电泳 将液氮低温保存的乳腺组织，腺癌及癌旁组织剪碎后各取100 mg，分别加入500 μl蛋白裂解液，4℃，15 000 r/min 匀浆后，2000 r/离心 15 min，上清移入另一管中，20 000 r/离心15 min，弃上清，取沉淀重新悬浮于200 μl匀浆缓冲液中，加蛋白提取液，充分混匀，沸水加热变性10 min，应用蛋白分析试剂测定蛋白浓度。向加样槽中加入各个样品及蛋白标志物各25 μl，电压75 V，电泳30 min。电泳完毕后取出凝胶，用电转膜仪将蛋白质转移至硝酸纤维素膜，加封闭液封闭，室温加第一抗体，二抗，显色。……