袁 伟，陆晓和，宫玉波，周 瑾

免疫排斥反应是导致角膜移植尤其高危角膜移植失败的主要原因。深入探讨排斥反应发生机理，通过多种手段及途径抑制角膜移植免疫排斥反应的发生，仍是眼科领域关注的焦点之一。近年来，利用基因治疗技术将抑制免疫排斥反应的基因转入角膜防治移植免疫排斥反应成为很有希望的新手段，其中，RNA干扰（RNAi）作为一种新兴的基因阻断技术，以其简单、有效、特异地下调细胞中基因的表达等优势，在人类基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景[1-3]。

本研究利用RNA干扰及转基因技术，采用球结膜下注射途径，将携带有报告基因GFP的针对大鼠共刺激分子ICOS为目的基因的Ad-siICOSEGFP应用至大鼠同种异体穿透性角膜移植模型，观察Ad-siICOS-EGFP对大鼠植片存活时间的影响、抑制大鼠角膜移植急性免疫排斥反应的效果，初步探索以ICOS为目的基因的RNAi技术用于防治角膜移植免疫排斥反应的可行性及有效途径。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康清洁级Wistar大鼠30只为供体，SD大鼠60只为受体，雌雄不限，体质量200～250 g，鼠龄2～3个月，南方医科大学实验动物中心提供（实验动物质量许可证号：0033674）。动物饲养温度为 22～25℃，湿度为（50±5）%。

1.2 主要试剂 Ad-siICOS-EGFP（携带报告基因绿色荧光蛋白且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒载体）溶液（北京本元正阳基因有限公司提供），物理滴度：3.7×1011v.p./ml；Ad-EGFP（携带报告基因绿色荧光蛋白的重组腺病毒）溶液（北京本元正阳基因有限公司提供）， 物理滴度：2.3×1011v.p./ml；30 g/L戊巴比妥钠溶液（南方医院实验动物中心提供）。……